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了解下化學發(fā)光定氮儀！
閱讀：1639 發(fā)布時間：2022-7-21
化學發(fā)光免疫分析是以標記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標記免疫分析法,，具有靈敏度高,、線性范圍寬,、儀器設(shè)備簡單、操作方便,、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點,。魯米諾,、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物,、辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學發(fā)光免疫分析中使用最多的標記物。
微粒子化學發(fā)光是化學發(fā)光免疫分析的特殊形式,，是以化學發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時應(yīng)用了磁性微珠做固相載體,，增加了吸附面積，使抗原抗體最大限度的結(jié)合,。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase,，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶,，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物,，當其躍遷回到基態(tài)時產(chǎn)生光子,。微粒子化學發(fā)光技術(shù)所需標本量極少,，孵育時間大大縮減，同時因其選擇性吸附抗原,，從而提高了特異性,、靈敏性,，使測定結(jié)果準確、可靠,，并減少污染。
工作原理：
化學發(fā)光定氮儀采用化學發(fā)光檢測原理,，待測樣品（或標樣）被引入到高溫裂解爐后,，在1050℃左右的高溫下,，樣品被*氣化并發(fā)生氧化裂解，其中的氮化物定量地轉(zhuǎn)化為一氧化氮(NO),。樣品氣經(jīng)過膜式干燥器脫去其中的水份。亞穩(wěn)態(tài)的一氧化氮在反應(yīng)室內(nèi)與來自臭氧發(fā)生器的O3氣體發(fā)生反應(yīng),，轉(zhuǎn)化為激發(fā)態(tài)的NO2*,。當激發(fā)態(tài)的NO2*躍遷到基態(tài)時發(fā)射出光子,，光信號由光電倍增管按特定波長檢測接收。再經(jīng)微電流放大器放大,、計算機數(shù)據(jù)處理,，即可轉(zhuǎn)換為與光強度成正比的電信號,。在一定的條件下,反應(yīng)中的化學發(fā)光強度與一氧化氮的生成量成正比，而一氧化氮的量又與樣品中的總氮含量成正比,，故可以通過測定化學發(fā)光的強度來測定樣品中的總氮含量。
化學發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒,、細菌和原蟲的DNA,。以魯米諾增強化學發(fā)光檢測體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標記探針,，雜交后經(jīng)過分離，再以過氧化物酶標記的親和素與生物素結(jié)合,，加入魯米諾和增強劑后測發(fā)光,。另一種是以過氧化物酶直接標記探針,，用增強的魯米諾檢測發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來標記,，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物,，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點,，發(fā)光時間可長達幾天,，既可用發(fā)光儀也能用簡單的感光膠片檢測。