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了解下化學(xué)發(fā)光定氮儀,!

閱讀:1754        發(fā)布時(shí)間:2022-7-21
化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號(hào)建立起來(lái)的一種非放射標(biāo)記免疫分析法,具有靈敏度高,、線性范圍寬,、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便,、分析速度快和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn),。魯米諾、異魯米諾及其衍生物,、吖啶酯衍生物,、辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用最多的標(biāo)記物。
微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式,,是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù),,同時(shí)應(yīng)用了磁性微珠做固相載體,,增加了吸附面積,使抗原抗體最大限度的結(jié)合,。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰).苯基.1,,2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase,ALP)的作用下,,迅速去磷酸酶,,生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-,進(jìn)而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物,,當(dāng)其躍遷回到基態(tài)時(shí)產(chǎn)生光子,。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少,孵育時(shí)間大大縮減,,同時(shí)因其選擇性吸附抗原,,從而提高了特異性、靈敏性,,使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確,、可靠,并減少污染,。
 
工作原理:
化學(xué)發(fā)光定氮儀采用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)原理,,待測(cè)樣品(或標(biāo)樣)被引入到高溫裂解爐后,在1050℃左右的高溫下,,樣品被*氣化并發(fā)生氧化裂解,,其中的氮化物定量地轉(zhuǎn)化為一氧化氮(NO)。樣品氣經(jīng)過(guò)膜式干燥器脫去其中的水份,。亞穩(wěn)態(tài)的一氧化氮在反應(yīng)室內(nèi)與來(lái)自臭氧發(fā)生器的O3氣體發(fā)生反應(yīng),,轉(zhuǎn)化為激發(fā)態(tài)的NO2*。當(dāng)激發(fā)態(tài)的NO2*躍遷到基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子,,光信號(hào)由光電倍增管按特定波長(zhǎng)檢測(cè)接收,。再經(jīng)微電流放大器放大、計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理,,即可轉(zhuǎn)換為與光強(qiáng)度成正比的電信號(hào),。在一定的條件下,反應(yīng)中的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與一氧化氮的生成量成正比,而一氧化氮的量又與樣品中的總氮含量成正比,,故可以通過(guò)測(cè)定化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度來(lái)測(cè)定樣品中的總氮含量,。
 
化學(xué)發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細(xì)菌和原蟲(chóng)的DNA,。以魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)體系的核酸探針主要有兩種形式,,一種是用生物素標(biāo)記探針,雜交后經(jīng)過(guò)分離,,再以過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合,,加入魯米諾和增強(qiáng)劑后測(cè)發(fā)光,。另一種是以過(guò)氧化物酶直接標(biāo)記探針,用增強(qiáng)的魯米諾檢測(cè)發(fā)光,。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來(lái)標(biāo)記,,吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時(shí)光,而AP以AMPPD作為發(fā)光底物,,其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點(diǎn),,發(fā)光時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)幾天,既可用發(fā)光儀也能用簡(jiǎn)單的感光膠片檢測(cè),。

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