硅膠基質(zhì)液相色譜柱檢測(cè)的對(duì)象是高沸點(diǎn)、難氣化的大分子化合物,，其具有,、快速、靈敏的特點(diǎn),，在生物醫(yī)藥研究,、檢測(cè)方面有較多的應(yīng)用。然而,，在使用硅膠基質(zhì)液相色譜柱檢測(cè)生物醫(yī)藥上的樣品時(shí),，由于行業(yè)特性，樣品中的蛋白質(zhì)殘留,，時(shí)常會(huì)對(duì)液相色譜柱造成污染,。本文主要介紹液相色譜硅膠鍵合反相柱上的蛋白質(zhì)殘余清洗方法。
在檢測(cè)生物物質(zhì)如血漿或血清等積累在反相色譜柱上,，必須采用不同與其他物質(zhì)的清洗方法,。大部分情況下，純有機(jī)溶劑如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白質(zhì),，因此不能有效地清洗柱子,。反而，有機(jī)溶劑和緩沖液,、酸,、離子對(duì)試劑等的混合物則能有效地溶解。為確保液相色譜柱再生的效果,，建議在使用溶劑沖洗色譜柱之前,，了解色譜柱的填料類型以及確保使用的溶劑能與柱子的填料相容。硅膠基質(zhì)的柱子通常來(lái)說(shuō)都是相容的,，但有機(jī)聚合物基質(zhì)的柱子可能會(huì)在某些溶劑組合中膨脹或收縮,，這樣會(huì)影響色譜柱的柱效。
在使用溶劑清洗反相色譜柱時(shí),，須對(duì)每個(gè)溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20體積,。由于有些溶劑系統(tǒng)黏性很大，沖洗的流速應(yīng)該相應(yīng)調(diào)整以確保不會(huì)超過(guò)泵壓。當(dāng)檢測(cè)的是尿液等樣品溶液時(shí),，至少應(yīng)該用40～50體積的HPLC級(jí)水來(lái)沖洗柱子,。
對(duì)于反相柱子，不建議用表面活性劑如十二烷基磺酸鈉（SDS）和三硝基甲苯,，因?yàn)檫@些化合物必然會(huì)牢固吸附在硅膠鍵合相柱子上很難除去,。用表面活性劑會(huì)影響裝填表面而改變其性質(zhì)。然而有一個(gè)分離小組的研究表明由某個(gè)小組做的污染后的柱子可以用500μL1％SDS溶液用1ml/min的流速清除下多肽合成產(chǎn)物,。如果繼續(xù)用從5%～95%含1%三氟乙酸的乙晴梯度洗脫,，可以恢復(fù)多肽的分離。
會(huì)員.png)
19
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)