阿維菌素類藥物是由阿維鏈霉菌產(chǎn)生的一類廣譜高效獸用抗寄生蟲藥，包括阿維菌素,、伊維菌素,、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素等。阿維菌素類藥物可對動物體外如疥螨,、蜱蟲,、跳蚤、線蟲等寄生蟲進行防治,，降低寄生蟲感染帶來的負面影響,。但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)阿維菌素類藥物對多種生物類群均有毒副作用,。根據(jù)GB 31650-2019要求,，規(guī)定了阿維菌素不得在泌乳期使用，在牛奶中伊維菌素,、多黏菌素和乙酰氨基阿維菌素三種藥物的殘留限_量要求依次為不高于10 μg/kg,、15 μg/kg、20 μg/kg,。
安譜實驗參照《GB 31659.4-2022 奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》,，采用CNWBOND HC-C18 SPE固相萃取柱凈化，對牛奶,、奶粉兩種基質(zhì)中阿維菌素類藥物殘留量進行測定,，方法回收率高，精密度好,。
一,、樣品前處理
樣品提取
稱取牛奶2 g（準確至±0.05 g）或奶粉0.5 g（準確至±0.01 g）于50 mL 離心管中，加乙腈8 mL,，渦旋后200 r/min 水平振蕩5 min，8000 r/min離心8 min,，轉(zhuǎn)移上清液至另一50 mL離心管中,，加水10 mL、三乙胺25 μL,，混勻,，備用。
SPE小柱操作：
固相萃取小柱：CNWBOND HC-C18 SPE,，貨號SBEQ-CA0854 ,，規(guī)格500 mg/6 mL；
活化：5 mL乙腈；
平衡：5 mL 淋洗溶液（30%乙腈水溶液,，含0.02%三乙胺）,；
上樣：全部備用液，速度每秒1滴,；
淋洗：5 mL淋洗液,，抽干，5 mL異辛烷淋洗,，抽干,；
洗脫：5 mL乙腈洗脫，洗脫后抽干,；
濃縮：收集洗脫液,，50℃水浴氮氣吹干，殘余物中加50%乙腈水溶液1.0 mL,，渦旋1 min充分溶解,，濾膜（有機相尼龍針式濾器，SCAA-104）過濾后供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定,。
基質(zhì)匹配標準曲線
精密量取阿維菌素類藥物標準工作液適量,，用50%乙腈水溶液稀釋阿維菌素、伊維菌素,、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素濃度分別為0.5 ng/mL,、1 ng/mL、2 ng/mL,、5ng/mL,、10ng/mL、20ng/mL,，50ng/mL,、100ng/mL和400ng/mL的系列標準工作液。各取標準工作液1.0 mL,，分別加入空白試料經(jīng)提取,、凈化和吹干后的殘余物中，充分溶解,，作為基質(zhì)匹配標準溶液,，過微孔濾膜（有機相尼龍針式濾器，SCAA-104）后上機測定,。以特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標,、基質(zhì)匹配標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線,。
二,、儀器條件
2.1 液相色譜：
a) Athena C18-WP 液相色譜柱（2.1 mm*50 mm，1.8 μm，貨號：LAEQ-2105UA）,；
b）柱溫：30℃
c）流速：0.40 mL/min
d）進樣量：10 µL,；
f）流動相：A：含0.1%甲酸的乙腈溶液，B：含0.1%甲酸的水溶液,；
表2-1 液相色譜梯度洗脫條件
2.2 質(zhì)譜條件：
a) 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀,；
b) 離子源：電噴霧離子源（ESI)；
c) 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM),；
d) 掃描方式：正離子模式,；
e) 離子源溫度：500℃；
f) 噴霧電壓：5500 V,；
表2-2 待測目標化合物定性,、定量離子對及電壓參考條件
三、實驗譜圖
3.1 牛奶基質(zhì)譜圖：
圖3-1 牛奶基質(zhì)空白譜圖
圖3-2 牛奶基質(zhì)標準溶液（20 μg/L）譜圖
圖3-3 牛奶基質(zhì)高水平加標（20 μg/L）譜圖
3.2 奶粉基質(zhì)譜圖：
圖3-4 奶粉基質(zhì)空白譜圖
圖3-5 奶粉基質(zhì)標準溶液（100 μg/L）譜圖
圖3-6 奶粉基質(zhì)高水平加標（100 μg/L）譜圖
四,、實驗數(shù)據(jù)
4.1標準曲線：
表4-1 待測目標物基質(zhì)標準曲線
4.2加標回收率數(shù)據(jù)：
表4-2 牛奶和奶粉基質(zhì)加標回收率（n=3）
五,、實驗結(jié)論
外標法處理數(shù)據(jù)，牛奶和奶粉兩種基質(zhì)中阿維菌素類藥物的標準曲線線性方程均線性良好,，R2 > 0.995,。在高、低水平下加標回收率均在70%—120%范圍內(nèi),，滿足國標實驗要求,。
六、產(chǎn)品推薦
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