體積排阻色譜SEC在樣品前處理中,，有著*的作用,，今天小編就帶您一起探尋一下GPC的原理，以及它在樣品前處理中的出色應(yīng)用,，一起來學(xué)習(xí)吧,！
1.定義
體積排阻色譜法（Size exclusion chromatography，SEC）是利用多孔凝膠固定相的*特性,，而產(chǎn)生的一種主要依據(jù)分子尺寸大小的差異來進(jìn)行分離的方法,，它又稱為空間排阻色譜法（Steric exclusion chromatography）。
2.分類
流動相：水,；凝膠過濾色譜（GFC）
流動相：有機(jī)相,； 凝膠滲透色譜（GPC）
3.固定相
填料：多孔凝膠（軟性凝膠和剛性凝膠）；
特點(diǎn)1：表面分布大小不一的小孔（如圖）
特點(diǎn)2：凝膠顆粒間存在空隙
4.分離
特點(diǎn)1：
化合物按照分子量大小,，分為小分子,，中等分子、大分子,。
小分子： 能通過小孔,、中孔、大孔,、空隙,；
中等分子：能通過中孔、大孔,、空隙,；
大分子： 被排阻在外，只能通過填料空隙,。
特點(diǎn)2：
分子量越小,，越能通過更多不同的孔徑的孔，分子量越大,，只能通過一些較大孔徑的孔,，分子量足夠大*被排斥在外，而不能通過孔,，只能通過填料間的空隙,。
特點(diǎn)3：
能通過的孔越多，所走的距離越長,，出峰越慢,；能通過的孔越少,，所走的距離越短出峰越快。
5.原理
基于分配理論：
6.確定分子量大小
如同色譜質(zhì)譜的定量分析一樣,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法來定量未知樣品的分析物質(zhì)的濃度,。在GPC中組分從柱中的洗脫體積（Ve）與分子量（M）存在對應(yīng)關(guān)系lgM- Ve，我們可先通過配置好的已知分子量的化合物分子,，進(jìn)樣后,，在凝膠柱上存在對應(yīng)的洗脫體積，來配制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，在相同色譜條件下,，未知的物的分子量，可以通過其洗脫體積,，在準(zhǔn)曲線上找到對應(yīng)的分子量,。
A: 分子量為106， 對應(yīng)洗脫體積為V0
B：分子量為103 , 對應(yīng)洗脫體積為V0+VP
X: 未知物,，對應(yīng)的洗脫體積為Vx,， 可求得其分子量大小
7.兩個極限
極限一：排阻極限
如果要分離的物質(zhì)，分子量足夠大,，比填料的大孔徑都大,，所有分子都將被排斥。
極限二：滲透極限
如果要分離的物質(zhì),，分子量足夠小,，比填料的小孔徑都小，所有分子都被滲透,。
結(jié)論：體積排阻色譜只能分離凝膠柱處于滲透極限對應(yīng)化合物分子量A和處于排阻極限對應(yīng)化合物分子量B之間的物質(zhì)。
8.舉個例子（土壤中的多環(huán)芳烴的分離）
圖中的藍(lán)色為為土壤萃取物的紫外吸收曲線,，可以發(fā)現(xiàn),，色譜峰型較寬，只出現(xiàn)一個混雜的色譜峰,，如不處理,，將難以進(jìn)行定量分析，黑色線為經(jīng)過SEC處理的土壤提取物,，當(dāng)?shù)弥喹h(huán)芳烴流出的時間后（收集點(diǎn)）,，在其流出時間處收集（紅色部位），將收集物在反相液相色譜上分析,，得到如下色譜圖：
經(jīng)過SEC處理的收集物（多環(huán)芳烴）,，在HPLC上 得到了好的分離，干擾性雜質(zhì)（玉米油,、DEHP等）也得到了很好的去除效果,。另外GPC得一個典型的應(yīng)用,，就是在農(nóng)藥殘留分析中，去除油脂,，大分子蛋白,、色素。SEC提供了常規(guī)SPE和LLE難以分離處理的復(fù)雜基質(zhì)樣品的前處理手段,。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
19
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)