今天是2019年的第yi個(gè)周一,，從今天開始,，安譜實(shí)驗(yàn)微xin公眾號(hào)將在每周一（法定節(jié)假日除外）準(zhǔn)時(shí)發(fā)布一條干貨，力爭從用戶視角出發(fā),，用更多更全面的專業(yè)內(nèi)容,，為廣大實(shí)驗(yàn)室科研人員搭建一個(gè)實(shí)用、專業(yè)的學(xué)習(xí)平臺(tái),，歡迎大家持續(xù)關(guān)注,！
好了，現(xiàn)在就開始今天的干貨放送吧,！
小柱“便秘”怎么辦,？
在進(jìn)入主題之前，先簡單介紹下固相萃?。⊿PE）技術(shù),。
固相萃取（Solid Phase Extraction,，簡稱 SPE）技術(shù),，發(fā)展于上世紀(jì) 70 年代，由于其具有高效,、可靠,、消耗試劑少等優(yōu)點(diǎn)，在許多領(lǐng)域取代了傳統(tǒng)的液－液萃取而成為樣品前處理的有效手段,， 在實(shí)驗(yàn)室中得到了越來越廣泛的應(yīng)用,。它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差將目標(biāo)物提純，有效地將目標(biāo)物與干擾物分離,，大大增強(qiáng)對(duì)分析物,，特別是痕量分析物的檢出能力，提高了被測樣品的回收率,。
萬千世界的奇妙,，造就了樣品基質(zhì)的千差萬別，蔬菜,，水果,，肉蛋奶,，水，土壤,， 橡膠,，紡織品等等，不管是食品還是環(huán)境的樣品,，復(fù)雜程度也是各不相同,。復(fù)雜程度一般的樣品可以用簡單提取作為前處理方法，但是對(duì)于特別復(fù)雜的樣品就需要經(jīng)過特殊的前處理,，比如用SPE 小柱,，做進(jìn)一步的凈化，把目標(biāo)物和雜質(zhì)分離,，進(jìn)而在色譜儀器上得到一個(gè)漂亮色譜圖,，大家看現(xiàn)行的一些標(biāo)準(zhǔn)就會(huì)發(fā)現(xiàn)，有些樣品基質(zhì)的前處理肯定是會(huì)用到 SPE 手段的,。
在用到 SPE 前處理的時(shí)候,，各位分析檢測工程師碰到煩人令人抓狂的問題是不是流速慢、流速不均,、堵,、下不去的情況；過小柱過到令人崩潰,，既然流速都保證不了,，怎么敢奢求回收率。
沒關(guān)系,，安譜實(shí)驗(yàn)憑借多年來在樣品前處理領(lǐng)域的深厚積累,，教您幾招，治liao小柱“便秘”的難題,。
SPE 的基本操作,，包括活化、平衡,、上樣,、淋洗、洗脫,，五個(gè)步驟,。問題無外乎出現(xiàn)在這幾個(gè)步驟里面，別急,，我們一個(gè)個(gè)過來看,。
活化平衡
一般反相或者離子交換類型的小柱分別用到甲醇和水進(jìn)行活化和平衡，正相小柱會(huì)用到石油醚或者正己烷來活化平衡。
1) 填料裝填過緊導(dǎo)致流速過慢,。 可以通過加壓加快流速,，或者購買對(duì)流速有嚴(yán)格質(zhì)控廠家的產(chǎn)品解決，安譜實(shí)驗(yàn)對(duì) CNW 小柱每個(gè)批次的流速都有嚴(yán)格的質(zhì)控范圍,，質(zhì)控范圍之外的小柱會(huì)被剔除。
2) 填料粒徑過小導(dǎo)致流速變慢,。 比如同樣的活化溶劑下,，100-200 目的 florisil 就會(huì)比60-100 目的更慢些。 可以根據(jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適規(guī)格的小柱,。
3) 柱管體積差異,。 500mg 3mL； 500mg 6mL,， 這兩種規(guī)格形成的填料高度不一樣,，顯然 500mg 6mL，直徑大,，填料高度低,，流速相對(duì)就快，就像地鐵站早高峰,，閘口多,，通過速率快，閘口少,，自然就擁堵,，通過速率慢?？筛鶕?jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適柱管的小柱,。
4) 溶劑順序加錯(cuò)。對(duì)于反相類型小柱,，如果不小心把水當(dāng)成活化溶劑,，就會(huì)出現(xiàn)流速很慢的問題，因?yàn)?strong>水對(duì)于疏水性反相填料的浸潤性是很差的,，所以不小心把水當(dāng)成甲醇來活化,，可能等到花兒都謝了，它還是流不下來,，注意別加錯(cuò)哦,。
5) 活化和平衡溶劑不互溶。比如二氯甲烷活化,，水平衡小柱,，大家就會(huì)發(fā)現(xiàn)，水加入后，流速也會(huì)慢到讓你崩潰,。 這是因?yàn)樗投燃淄榈幕ト苄圆钤斐傻?/span>,，可以加入過渡溶劑甲醇來解決，甲醇既可以與二氯甲烷互溶也可以和水互溶,。
6) 空氣進(jìn)入填料,。這個(gè)原因比較常見但也是比較難發(fā)現(xiàn)的原因， SPE 小柱是由篩板,，填料,，柱管組成，不是有機(jī)的整體,，所以在運(yùn)輸尤其是長途運(yùn)輸?shù)倪^程中,，就會(huì)出現(xiàn)微小的松動(dòng)，導(dǎo)致空氣進(jìn)入填料,，一般不容易被肉眼所發(fā)現(xiàn),。含有空氣的填料在氣壓的作用下導(dǎo)致活化溶劑流下速度很慢。說到這大家可能就容易理解為什么同一批次的小柱,，會(huì)出現(xiàn)輕微的流速參差不齊的情況,，可以用 SPE 裝置加正壓的方式抽掉空氣后，再一起加溶劑,。
上樣
由于樣品基質(zhì)的復(fù)雜性,，篩板孔徑在 20um，在上樣之前需要把顆粒物給過濾掉,，比如含蛋白的樣品需要加酸,、鹽、有機(jī)溶劑,、加熱等方式將蛋白處理掉,；對(duì)于一般的基質(zhì)，應(yīng)采用過濾,，離心或者高速離心,，換大孔徑填料等方式進(jìn)行處理，現(xiàn)在好多第三方檢測單位樣品量非常多,，但是該做的前處理步驟不能省,，否則對(duì)儀器的損壞，對(duì)數(shù)據(jù)的可靠性都會(huì)有一定的影響,。
淋洗和洗脫
一般在淋洗和洗脫這兩步出現(xiàn)流速慢的情形比較少,，因?yàn)榱芟春拖疵摱际遣粠Щ|(zhì)的純?nèi)軇话闵蠘硬襟E沒有堵塞,，就不會(huì)影響到淋洗和洗脫,?？赡艹霈F(xiàn)流速慢的地方在于淋洗完小柱并干燥之后，因?yàn)橐坏└稍镄≈?，就?huì)使空氣進(jìn)入填料,，這就回到了活化平衡導(dǎo)致流速慢的第 6 個(gè)原因，只要稍微加壓就可以解決問題了,。
當(dāng)然我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)的時(shí)候,，不是每個(gè)步驟都要求快，魯迅說過：欲速則不達(dá),，所以在小柱操作技巧里面,，有兩個(gè)步驟是需要控制流速的， 分別是上樣和洗脫,；這兩個(gè)過程是目標(biāo)物與柱填料通過分子間作用力進(jìn)行吸附和解吸附的過程，需要時(shí)間慢慢作用,，大家一定要注意呦,！
這一次干貨時(shí)間就為大家分享到這里，
下次再見,！
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