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安譜實(shí)驗(yàn)來(lái)守護(hù)您的SPE小柱流速

閱讀:1840      發(fā)布時(shí)間:2020-8-10
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在SPE小柱的使用過(guò)程中有許多老師會(huì)疑惑流速問(wèn)題,。在通常的情況下,,我們對(duì)于正常流速要求是0.5滴到1滴每秒。流速慢,,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),,流速快,有可能導(dǎo)致回收率不穩(wěn)定,。那么今天我們就來(lái)深入討論一下影響SPE流速因素吧,。

 

原因一:樣品制備問(wèn)題

 

大多數(shù)流速問(wèn)題產(chǎn)生的原因都是樣品制備不充分。比如樣品渾濁,,離心過(guò)濾不充分導(dǎo)致上樣時(shí)候篩板堵塞,,或者是樣品本身的蛋白等大分子物質(zhì)未經(jīng)過(guò)充分的處理,沒(méi)有進(jìn)行有效蛋白沉降,導(dǎo)致篩板堵塞,。這類原因造成的流速問(wèn)題可以通過(guò)改善前處理手段來(lái)解決,。所以說(shuō)樣品制備充分是保障SPE正常流速的第yi步。

 

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原因二:小柱本身因素(填料粒徑和柱管體積)

 

01

填料粒徑的影響

 

填料粒徑大填裝越松散,,對(duì)流動(dòng)相阻力小,,流速越快;粒徑越小,,填裝越緊致,,流速越慢。這種現(xiàn)象在弗羅里硅土和硅藻土小柱上表現(xiàn)得很明顯,。一般小柱填料粒徑的范圍是40-60um,,農(nóng)殘級(jí)的弗羅里硅土粒徑范圍在75-150um,大孔硅藻土小柱600-900um,。所以弗羅里硅土和硅藻土小柱的流速會(huì)比一般小柱流速快,,尤其是大孔硅藻土小柱,使用時(shí)需要加上包裝中配套的導(dǎo)流針來(lái)控制流速,。

 

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02

柱管體積的影響

 

對(duì)于同種填料的產(chǎn)品,,當(dāng)填料量一定時(shí),使用的柱管體積越小流速越慢,。這是因?yàn)橹荏w積越小,,橫截面小,填裝高度越高,,所以流動(dòng)相阻力會(huì)增大,,導(dǎo)致流速變慢。所以在實(shí)際檢測(cè)工作中,,如果對(duì)上樣量和上樣流速有要求,,在不影響固相萃取效果的前提下,可以選擇大體積柱管或者高通量的膜片裝置,,CNW的DISK圓盤上樣速度可以達(dá)到50ml/min,在處理大規(guī)模水樣時(shí)有明顯的流速優(yōu)勢(shì),。

 

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原因三:溶劑的選擇和使用

 

溶劑的選擇是很多老師在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中容易忽視的點(diǎn),比如:C18小柱,,一般用甲醇活化,,如果用水活化,由于C18的疏水性,,水的浸潤(rùn)速度會(huì)慢于甲醇,,導(dǎo)致流速變慢。遇到這種情況,,調(diào)整活化溶劑就可以解決問(wèn)題了。

 

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溶劑使用順序也會(huì)影響流速,比如活化溶劑為二氯甲烷,,平衡溶劑為水,,由于二氯甲烷和水不互溶,所以活化平衡時(shí)流速就會(huì)很慢,。這種情況我們建議在兩種不互溶的溶劑之間加入過(guò)渡溶劑甲醇,,這樣就可以解決問(wèn)題了。

 

原因四:空氣層影響

 

空氣層會(huì)阻礙液體的流路從而造成流速問(wèn)題,。篩板或者填料松動(dòng)是形成空氣層的主要原因,。商品化的產(chǎn)品經(jīng)過(guò)運(yùn)輸?shù)竭_(dá)用戶手中,在運(yùn)輸過(guò)程中,,填料和篩板間若發(fā)生了位移松動(dòng),,就容易形成空氣層。這種空氣層有時(shí)比較明顯,,可以看到填料有斷層或者細(xì)縫,。有時(shí)這種松動(dòng)不明顯,只能在小柱使用過(guò)程中感受到流速上的差異,。這種情況下,,輕微的松動(dòng)問(wèn)題可以通過(guò)壓實(shí)篩板或者施加正負(fù)壓趕走空氣就可以解決了。

 

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除了運(yùn)輸過(guò)程可能造成篩板松動(dòng),,在小柱的SPE洗脫程序中,,如果在活化平衡階段不小心讓溶劑走干了,也會(huì)使填料中進(jìn)入空氣導(dǎo)致影響流速,。這個(gè)時(shí)候通過(guò)加壓或者抽真空排走空氣就可以解決問(wèn)題了,。

總結(jié)下來(lái)影響小柱流速的因素主要有以下幾個(gè):樣品制備,填料粒徑和柱管體積,,溶劑選擇和使用以及空氣層的影響,。當(dāng)然還會(huì)有一些別的影響因素, 各位老師在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如果有流速方面問(wèn)題,,可以先排查一下這些因素,,也可以聯(lián)系我們安譜實(shí)驗(yàn)哦,我們的熱情24小時(shí)在線哦~

 

 

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