確定產(chǎn)品消毒后啟用時間,，當(dāng)新產(chǎn)品或原材料、消毒工藝改變可能影響產(chǎn)品理化性能時應(yīng)予測試,。

　　環(huán)氧乙烷消毒后,，立即從同一消毒批號的三個大包裝中隨機(jī)抽取一定量小包裝樣品，采樣量至少應(yīng)滿足規(guī)定所需測定次數(shù)的量(留一定量在必要時進(jìn)行復(fù)測用),。

　　分別于環(huán)氧乙烷消毒后24 h及以后每隔數(shù)天進(jìn)行殘留量測定,，直至殘留量降至本標(biāo)準(zhǔn)4.6所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)值以下。

儀器：氣相色譜儀,，氫焰檢測器(FID),。

柱：Chromosorb 101 HP60～80目；玻璃柱長2m,，φ 3 mm,。柱溫：120℃,。

檢測器：150℃。

氣化器：150℃,。

載氣量：氮氣：35 mL/min,。

氫氣：35 mL/min。

空氣：350 mL/min,。

柱前壓約為108 kPa,。

D4.1 標(biāo)準(zhǔn)配制

　　用100 mL玻璃針筒從純環(huán)氧乙烷小鋼瓶中抽取環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣(重復(fù)放空二次，以排除原有空氣),，塞上橡皮頭,，用10 mL針筒抽取上述100 mL針筒中純環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣10 mL，用氮氣稀釋到100 mL(可將10 mL標(biāo)準(zhǔn)氣注入到已有90 mL氮氣的帶橡皮塞頭的針筒中來完成),。用同樣的方法根據(jù)需要再逐級稀釋2～3次(稀釋1 000～10 000倍),，作三個濃度的標(biāo)準(zhǔn)氣體。按環(huán)氧乙烷小鋼瓶中環(huán)氧乙烷的純度,、稀釋倍數(shù)和室溫計算出zui后標(biāo)準(zhǔn)氣中的環(huán)氧乙烷濃度,。

計算公式如下：

　　k―― 稀釋倍數(shù),；

　　t―― 室溫，℃,。

D4.2 樣品處理

　　至少取2個zui小包裝產(chǎn)品,，將其剪碎，隨機(jī)稱取2 g,，放入萃取容器中,，加入5 mL去離子水，充分搖勻,，放置4h或振蕩30 min待用,。如被檢樣品為吸水樹脂材料產(chǎn)品，可適當(dāng)增加去離子水量,，以確保至少可吸出2mL樣液,。

D4.3 分析

（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）

生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試方法

E1.1 樣品采集

　　在動態(tài)下進(jìn)行。

　　室內(nèi)面積不超過30 m²,，在對角線上設(shè)里,、中、外三點,，里,、外點位置距墻1 m；室內(nèi)面積超過30 m²,，設(shè)東,、西、南,、北,、中5點，周圍4點距墻1 m,。

　　采樣時,，將含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9 cm)置采樣點(約桌面高度)，打開平皿蓋,，使平板在空氣中暴露5 min,。

E1.2 細(xì)菌培養(yǎng)

　　在采樣前將準(zhǔn)備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置35℃±2℃ 培養(yǎng)24 h，取出檢查有無污染,，將污染培養(yǎng)基剔除,。

　　將已采集的培養(yǎng)基在6 h內(nèi)送實驗室，于35℃±2℃ 培養(yǎng)48h觀察結(jié)果,，計數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù),。

E1.3 菌落計算

式中：y₁――空氣中細(xì)菌菌落總數(shù)，cfu/m³;

A――平板上平均細(xì)菌菌落數(shù)；

S₁――平板面積,，cm²;

t--暴露時間,，min。

E2.1 樣品采集

　　工作臺：將經(jīng)滅菌的內(nèi)徑為5cm×5cm的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面,，用一浸有滅菌生理鹽水的棉簽在其內(nèi)涂抹10次,，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢,。

　　工人手：被檢人五指并攏,，用一浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次,，然后剪去手接觸部分棉棒,，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。

E2.2 細(xì)菌菌落總數(shù)檢測

將已采集的樣品在6h內(nèi)送實驗室,，每支采樣管充分混勻后取1mL樣液,，放入滅菌平皿內(nèi)，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,，每個樣品平行接種兩塊平皿,，置35℃±2℃ 培養(yǎng)48 h，計數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù),。

式中：y₂――工作臺表面細(xì)菌菌落總數(shù),，cfu/cm²;

A――平板上平均細(xì)菌菌落數(shù)；

S₂――平板面積,，cm²;

y₃--工人手表面細(xì)菌菌落總數(shù),，cfu/只手。

E2.3 致病菌檢測

按本標(biāo)準(zhǔn)附錄B進(jìn)行,。

（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）

消毒效果生物監(jiān)測評價方法

　　參照GB15981－1995規(guī)定執(zhí)行。

　　成分：

　　制法：除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中,，調(diào)pH至7.2～7.4,，加入瓊脂，加熱溶解,，分裝試管,，121℃滅菌15min后備用。

　　成分：

　　制法：將蛋白胨,、膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH至7.4,，加入指示劑,，分裝每管50 mL，并放入一個小倒管,，115℃滅菌15 min,，即得。

　　成分：

　　制法：將蛋白胨及乳糖溶于水中,，校正pH至7.4,，加入指示劑,，分裝每管10 mL，并放入一個小倒管,，115℃滅菌15 min,，即得。

　　制法：將蛋白胨,、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中,，校正pH至7.1，分裝于燒瓶內(nèi),，121℃滅菌15 min備用,，臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至55℃,，加入伊紅和美藍(lán)溶液搖勻,，傾注平板。

　　成分：

　　制法：將各種成分混合(如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替),，加熱溶解,，調(diào)pH至7.2～7.3，分裝,，121℃滅菌20min,，搖勻，避免吐溫80沉于底部,，冷至25℃后使用,。

　　成分：

　　制法：除瓊脂外，上述各成分混合加熱溶解,，調(diào)pH至7.4～7.6,，然后加入瓊脂，115℃滅菌20 min,，冷至55℃左右傾注平皿,。

　　成分：

　　制法：將蛋白胨、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中,，加熱溶解,，調(diào)pH至7.4，加入瓊脂和甘油,，加熱溶解,，分裝試管，115℃滅菌20 min,，制成斜面?zhèn)溆谩?/P>

　　成分：

　　制法：各成分加入蒸餾水中浸泡20 min,，加熱攪拌溶解，調(diào)pH至7.4,，5 mL分裝試管中,，115℃ 滅菌20 min,，直立制成高層備用。

　　成分：

　　制法：將蛋白胨與酵母浸膏加到蒸餾水中,，加熱溶解,，調(diào)pH至7.2，煮沸過濾后補(bǔ)足液量,，加入硝酸鉀和亞硝酸鈉溶解均勻,，分裝到有小倒管的試管中，115℃滅菌20 min備用,。

　　成分：

　　制法：將滅菌后的營養(yǎng)瓊脂加熱溶化,，涼至55℃左右，用無菌方法將10 mL脫纖維血加入后搖勻,，傾注平皿置冰箱備用。

　　成分：

　　制法：將蛋白胨,、氯化鈉,、牛肉膏加到蒸餾水中，加熱溶解,，調(diào)pH至7.4,，加入甘露醇和溴麝香草酚藍(lán)混勻后，分裝試管,，115℃滅菌20 min備用,。

　　成分：

　　制法：上述成分溶于蒸餾水中，調(diào)pH至7.2～7.4,，加熱溶解,，分裝試管，121℃滅菌15min后備用,。

　　制法：取滅菌3.8％檸檬酸鈉1份,，兔全血4份，混勻靜置,，3 000 r/min離心5 min,，取上清，棄血球,。

用700 mL蒸餾水將瓊脂溶解,，300 mL蒸餾水將葡萄糖與蛋白胨溶解，混合上述兩部分,，搖勻后分裝,，115℃滅菌15 min，即得,。使用前,，用過濾除菌方法加入0.1g/L的氯霉素或者0.03g/L的鏈霉素,。

　　定性試驗采用沙氏培養(yǎng)液，即除不加瓊脂外其他成分與制法同上,。

G15 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液

調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2～7.4,，分裝，115℃滅菌30 min,，即得,。

　　調(diào)節(jié)pH至7.0～7.2，加2％溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL,，115℃ 滅菌30 min,，即得。

　　結(jié)晶紫染色液：

　　將結(jié)晶紫溶解于乙醇中,，然后與草酸銨溶液混合,。

　　革蘭氏碘液：

　脫色劑

95％乙醇

復(fù)染液：

(1)沙黃復(fù)染液：

將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋,。

(2)稀石炭酸復(fù)紅液

稱取堿性復(fù)紅10g,，研細(xì)，加95％乙醇100mL,，放置過夜,，濾紙過濾。取該液10mL,，加5％石炭酸水溶液90mL混合,，即為石炭酸復(fù)紅液。再取此液10mL,，加水90mL,，即為稀石炭酸復(fù)紅液。

　　成分：