酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一種實(shí)驗(yàn)室常用的檢測方法,，廣泛應(yīng)用于測量溶液中的分析物（抗體或抗原）的濃度,。與其他基于抗體的檢測方法不同的是,，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)或酶免疫測定（EIA）通過與固相支持物的結(jié)合和系列洗滌步驟,，實(shí)現(xiàn)特異性和非特異性相互作用的分離,，并可通過*終有色產(chǎn)物的形成，定量分析原始樣品中分析物的含量,。

該實(shí)驗(yàn)可迅速分析大量平行樣品,，在基礎(chǔ)研究和臨床診斷實(shí)踐中廣泛使用。

常見ELISA類型

ELISA 實(shí)驗(yàn)通常以細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、血清,、血漿以及組織裂解物等為樣品,。該實(shí)驗(yàn)bibei三種試劑：固相的抗原或抗體；酶標(biāo)記的抗原或抗體,；酶作用的底物,。根據(jù)樣品的性質(zhì)、檢測的實(shí)驗(yàn)條件,、試劑的來源,，可設(shè)計(jì)出不同類型的ELISA檢測方法,。

一,、直接ELISA

原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì),。加酶標(biāo)抗體進(jìn)行孵育,。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體,。此時(shí)固相上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān),。加底物反應(yīng)。直接法主要用于測定抗原,。

優(yōu)點(diǎn)：操作流程簡短,，實(shí)驗(yàn)步驟少；無需使用二抗,，避免了交叉反應(yīng),；實(shí)驗(yàn)步驟少，操作不易出錯(cuò),。

缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中的一抗需要直接用酶標(biāo)記,，成本相對(duì)較高。

二,、間接法ELISA

原理：將抗原與固相載體相連結(jié),，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì),。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合,，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,，加酶標(biāo)二抗,。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶,。洗滌后,，加底物顯色。

優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)二抗可加強(qiáng)信號(hào),，提高靈敏度,；靈活性更大,，同一酶標(biāo)二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗；不直標(biāo)一抗,，可保留更多的免疫反應(yīng)性,；成本更低，使用標(biāo)記抗體更少,。

缺點(diǎn)：交叉反應(yīng)幾率升高,。

三、雙抗夾心法ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子,，但不適用于小分子抗原,。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體,。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì),。加入待檢樣品，保溫孵育,。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合,，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì),。加酶標(biāo)抗體（檢測抗體）保溫孵育,。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體,。加底物反應(yīng),。

雙抗原夾心法測抗體的反應(yīng)模式與測抗原相似，用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,，以檢測相應(yīng)的抗體,。

優(yōu)點(diǎn)：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測抗體都是檢測特異性的,；適用于復(fù)雜樣品,，抗原不需要進(jìn)行純化即可用于檢測；靈活性更大,，靈敏度更高,，可采用直接法也可采用間接法。

缺點(diǎn)：檢測物需要擁有兩個(gè)以上不同的抗原表位或多個(gè)相同的重復(fù)表位,；不適用于檢測小分子物質(zhì),。

四、競爭法ELISA

原理：競爭法ELISA*為復(fù)雜,，通常用于檢測小分子如半抗原,、激素、藥物等,。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有xianliang抗體,，當(dāng)樣品中的游離抗原越多,，就可結(jié)合越多的抗體，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體,。反之亦然,。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物，只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物,。顯示經(jīng)計(jì)算可得樣品中抗原的含量,。競爭法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式,。