熒光檢測器是液相色譜系統(tǒng)的“眼睛”，測量離開柱的樣品的濃度或質(zhì)量,。光電檢測器測量柱流出物的光吸收,、熒光和折光率的變化。電化學(xué)和電導(dǎo)檢測器溶液的變化,。其靈敏度在目前常用的HPLC檢測器中高,，在HPLC中應(yīng)用較多,。能發(fā)射熒光的物質(zhì)或能用柱前或柱后衍生法轉(zhuǎn)變成熒光衍生物的物質(zhì)均可以使用熒光檢測器進(jìn)行分析。
激發(fā)波長和發(fā)射波長是熒光檢測的必要參數(shù),。選擇合適的激發(fā)波長和發(fā)射波長,，對檢測的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測靈敏度,。
熒光屬于光致發(fā)光,，需選擇合適的激發(fā)光波長(Ex)以利于檢測。激發(fā)波長可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定,。激發(fā)光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發(fā)單色器,，使不同波長的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長的發(fā)射單色器,，由光檢測元件檢測,。zui終得到熒光強(qiáng)度對激發(fā)波長的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的zui大波長處,，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目zui多,，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強(qiáng)的熒光,。當(dāng)考慮靈敏度時,，測定應(yīng)選擇zui大激發(fā)波長。
一般所說的熒光光譜,，實際上僅指熒光發(fā)射光譜,。它是在激發(fā)單色器波長固定時，發(fā)射單色器進(jìn)行波長掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(即發(fā)射波長,，Em)變化的曲線,。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測定時選擇合適的測定波長的依據(jù),。
22