1、 怎樣提高點(diǎn)樣效率? 點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來源,。實(shí)驗(yàn)證明：定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣,；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大,。為避免不同定量毛細(xì)管間的點(diǎn)樣誤差、建議一塊薄層板上用同一只定量毛細(xì)管,。但應(yīng)注意更換樣品時(shí),，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時(shí),，溶樣溶劑黏度不能過高,，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過低則進(jìn)樣體積易變,，過高則會(huì)改變展開劑組成,；對(duì)樣品溶解度過高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象；常用的溶劑為甲醇,、乙醇,、丙酮,。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距1--2cm 底邊距1.5cm,；HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm 底邊距1cm。
2,、展開劑的選擇 TLC與
HPLC相比,，一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性。流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1--0.7之間并達(dá)到較好的分離,，與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成,。流動(dòng)相強(qiáng)度越大，溶質(zhì)RF值越大,，但很可能降低分離能力,；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物，根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系,。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì),、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合RF值,，適合的RF值找到后,，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè)，以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形,，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系,，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系,，并且極性一致,，可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成。這種方法較為直觀,，也較簡(jiǎn)單,。
3、TLC的通用顯色方法 理想的顯色希望靈敏度高,、斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定,、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好、斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比,。在樣品組成并不*已知的情況下,，通用顯色方法顯得成尤為重要。通用顯色法主要有：
（1）,、紫外照射法：方便,，不破壞樣品；
（2）,、碘蒸氣法：通用性強(qiáng),，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用；
（3）,、熒光試劑：制造熒光背景,，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯,；
（4）,、硫酸溶液：對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性,。
會(huì)員.png)
22