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產(chǎn)品簡介：

由于糞便中有機質(zhì)含量豐富，對 RT-PCR 等后續(xù)反應(yīng)有極大的抑制作用,， 所以從糞便中提取高純度的 RNA 一直是十分棘手的問題。本產(chǎn)品是在天恩澤 基因糞便 RNAout 基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式糞便 RNA 提取產(chǎn)品,。

產(chǎn)品特點：

1.操作比非柱式法更加簡單快速,，處理一個樣品只需要約十幾分鐘。

2.去污染效果好,，RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右,。

3.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR,、Northern 雜交、cDNA 合成等實驗,。

4.性價比高于進口的柱式糞便 RNA 提取產(chǎn)品,。

5.試劑無毒無害,環(huán)保。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝材料

糞便 RNA 純化溶液 A50 mL60mL 本色瓶

糞便 RNA 純化溶液 B15 mL15mL 棕色瓶

糞便 RNA 純化溶液 C50 mL60mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

糞便RNA純化試劑盒（過柱法）常溫運輸和保存,，溶液 B 長期保存需要放 4℃,，有效期一年。

自備試劑

氯仿,。

使用方法：

1.稱取 0.5-1 g 糞便放入到含液氮的研缽中,，迅速將凍成固體的糞便研磨成粉末后。

2.將粉末轉(zhuǎn)移到 5-15mL 的塑料離心管中（不能使用玻璃離心管）,，加入 1 mL 65℃預(yù)熱的糞便 RNA 純化溶液 A,，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻,。

3.將勻漿物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5mL 塑料離心管中,。

4.在離心管中加入 0.3 mL 的糞便 RNA 純化溶液 B（溶液 B 用前需要搖勻，呈渾濁狀）和 0.2 mL 自備氯仿,，在振蕩器上振蕩 30 秒混勻,，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來,。

5.室溫 13000 g 離心 3 分鐘,，兩相間將有約 5-10 毫米厚的細胞破碎物。

6.將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中,，下層有機相和中間層含有 DNA,、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取,。最好留下100 uL 上清液不取,。

7.加入等體積的糞便 RNA 純化溶液 C，充分顛倒混勻,。如果有沉淀產(chǎn)生,， 千萬不要去掉沉淀,，一定要把所有的混合物上柱。

8.將一半的溶液（如果有沉淀,，則先混勻）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,，13000g 室溫離心半分鐘，棄穿透液,。

9.將剩下的一半溶液（如果有沉淀,，則先混勻）轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中， 13000g 室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。

10.加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。

11.室溫離心半分鐘。此步十分重要,，否則殘留的乙醇會影響 RNA 的使用,。

12.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脫液,，室溫放置 1-2 分鐘,。

13.13000g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品,，可以立即使用或存放于-80℃待用,。

14.RNA 完整性的電泳檢測：由于糞便 RNA 含有腸道上皮細胞和腸道細菌的RNA，它們的分子量大小不一,，所以電泳時不會形成清晰的條帶,。

15.RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：通過OD260 的光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），進而計算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/糞便的用量),。

16.RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)),，高于此范圍則分 別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng),。

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