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產(chǎn)品簡介：

4×LAMP MasterMix（熒光染料法）含有熒光染料法 LAMP 擴增所需的所有成分，可以用于熒光染料實時 LAMP 等溫擴增,。LAMP 即 Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導等溫擴增）,，它利用 4 條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的 Bst DNA 聚合酶，在等溫條件下(65℃左右) 30－60 分鐘完成擴增,。該技術(shù)在靈敏度,、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優(yōu)于定性PCR 技術(shù)，同時還不需要昂貴的儀器設(shè)備,。目前已成功應(yīng)用于生物的快速檢測,， 廣泛用于各個領(lǐng)域。

產(chǎn)品特點：

1.即開即用,，含有本公司開發(fā)的 LAMP 專用熒光熒光染料,，比常規(guī)的 SYBR 更好,，不會產(chǎn)生抑制。

2.在熒光定量 PCR 一起上進行擴增時,，可以實時跟蹤擴增過程,，但不宜用于定量（這是 LAMP 技術(shù)決定的）。

3.高特異性,，精心優(yōu)化的配方,，非特異擴增比自配的試劑更低。

4.高靈敏度,，一般比 PCR 靈敏一個數(shù)量級（取決于引物的篩選）,。

5.4×MasterMix，最多可加入 14uL 模板,，降低漏檢率,。

6.本試劑盒足夠 50 次 20uL 體系的 LAMP 擴增。

7.提供擴增對照,，便于在遇到困難時分析原因,。

8.本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成份規(guī)格包裝

4×LAMP MasterMix

（含熒光染料,，待加酶）200uL0.5mL 綠蓋管

Bst DNA 聚合酶 2.050uL0.5mL 紅蓋管

LAMP 陽性對照

模板-引物混合物50uL0.5mL 黃蓋管

使用手冊1 份無

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存,，有效期一年,。

自備試劑

LAMP 模板、LAMP 引物

使用方法：

1.制備模板DNA：用于選用合適的方法制備模板DNA,。如果有N個樣品,，最好設(shè)置N+2個樣品制備，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照,，一個是樣品制備陰性對照,。

2.配制自備的20×LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到下表所標注的母液濃度,，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水,， 最后得到0.1mL的20×LAMP引物混合液，此混合液足夠100次20uL體系的LAMP擴增,。如果需要配制的20×LAMP引物混合液體積異于0.1mL,，則各成分的用量請按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置2年,。

注：如果沒有Loop引物,，則用水替代。

3.在冰上融化4×LAMP MasterMix（含熒光染料，待加酶）,，混勻,，稍離心。第一次使用時,， 請將50uL Bst DNA聚合酶2.0 全部加入到4 ×LAMP MasterMix中輕柔混勻,，然后再使用。如果有N個樣品,，則在N+2個反應(yīng)管中加入以下組份,，多出的一管是LAMP擴增陽性對照（PC），一管是LAMP 擴增陰性對照（NC）：

4.混勻,，置于熒光定量PCR儀器中65℃保溫60分鐘,，每分鐘采集一次SYBR 通道的熒光信號。如果熒光定量PCR儀不能設(shè)置恒溫擴增參數(shù),，可以把變性復性和擴增三個溫度都設(shè)置為65℃,，三個步驟的總時間為1分鐘即可，共60 個循環(huán),，在任何一步采集熒光信號即可,。

5.結(jié)果分析：實驗有效性判定。如果兩個陽性對照能夠得到標準的S型擴增曲線而兩個陰性對照都沒有擴增,，則實驗有效,，才有必要對樣品進行分析。如果陽性對照沒有出現(xiàn)S型擴增曲線,，則說明試劑盒可能失效,，實驗無效。如果陰性對照有S型擴增曲線,，則說明LAMP引物設(shè)計得不好,，有非特異擴增,， 需要重新優(yōu)化引物,。也可能是環(huán)境或試劑有污染，實驗無效,。遇到實驗無效的情況,，請跟廠家客戶聯(lián)系，分析原因后再恢復實驗,。

6. 如果實驗有效,，則分析樣品。凡是有S擴增曲線的,，可以判斷為陽性,。凡是沒有S擴增曲線的，可以判斷為陰性。典型的熒光檢測結(jié)果見下圖,。左邊為陽性結(jié)果,，擴增曲線為S型，右邊為陰性結(jié)果,，擴增曲線不呈S型,。

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