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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

小韋榮球菌(Veillonella parvula)是一種革蘭氏陰性厭氧球菌。小韋榮球菌通常存在于人類的口腔,、腸道和上呼吸道等部位,。小韋榮球菌本身是人體正常菌群的一部分，但在特定情況下可能會(huì)引發(fā)一些危害,。當(dāng)人體免疫力下降,、局部微生態(tài)失衡或有創(chuàng)傷等情況時(shí)，小韋榮球菌可能會(huì)過度生長(zhǎng)并引起感染,，例如,，它可能會(huì)導(dǎo)致口腔感染，如牙周炎,、牙髓炎等,；在呼吸道，可能會(huì)引起肺炎等疾??；在腸道，可能會(huì)參與腸道炎癥性疾病的發(fā)生,。此外,，如果小韋榮球菌進(jìn)入血液，還可能引發(fā)敗血癥等嚴(yán)重的全身性感染,，對(duì)人體健康造成較大威脅,。因此快速檢測(cè)小韋榮球菌具有重要的意義。為此,，本公司以探針法qPCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了小韋榮球菌的檢測(cè)試劑盒,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,。

2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,，分析靈敏度高，可以達(dá)到 100 拷貝/反應(yīng),。

3.提供陽性對(duì)照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高，引物是根據(jù)小韋榮球菌 DNA 高度保守區(qū)設(shè)計(jì),，不會(huì)跟其他生物的 DNA

發(fā)生交叉反應(yīng),。

5.既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè),。定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為 5 個(gè)數(shù)量級(jí),。

6.本產(chǎn)品足夠 50 次 20 μL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。

7.小韋榮球菌探針法熒光PCR試劑盒只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR,，具有快速,、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn),。

試劑盒成分

2×Probe qPCR MasterMix,、熒光 PCR 專用模板稀釋液、超純水,、小韋榮球菌 qPCR 引物-探針干粉,、小韋榮球菌qPCR 陽性對(duì)照(1E7 拷貝/μL)、使用手冊(cè),。

自備試劑

樣品 DNA,，超純水，核酸純化試劑盒,。

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，保存期限為 24 個(gè)月,。

使用方法：

一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 1E1-1E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 6,、5、4,、3,、2、1,。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,，最好用帶芯槍頭，下同）,。在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

4.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

5.換槍頭,，在 4 號(hào)管中加入 5 μL 1E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

二、樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品,，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性對(duì)照），

一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）,?？梢杂?10 μL 上步所得第 4 號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣，以此作為 PC,。另外用水作為 NC,。

8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA- 提取試劑盒兼容,，也可以選購本公司的核酸-提取試劑,。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個(gè)PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,，1 個(gè)用于PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管,，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照（直接用第 6 步第 4 號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板）,。下面只以定量分析為例描述操作步驟,。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：

11.蓋上蓋子后上機(jī),，按下面參數(shù)進(jìn)行 qPCR：

過程溫度時(shí)間

預(yù)變性95℃10 min.

PCR 反應(yīng)

（40 個(gè)循環(huán)）95℃15 sec.

60℃1 min（采集 FAM 通道的熒

光信號(hào)，淬滅基團(tuán)為 MGB）

四,、數(shù)據(jù)處理

12.如果樣本制備陽性對(duì)照或 PCR 陽性對(duì)照(包括標(biāo)曲樣本)結(jié)果為陰性,，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù),，需要重新樣本制備,，重新進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對(duì)照或 PCR 陰性對(duì)照結(jié)果為陽性,，說明環(huán)境污染,，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無效， 不需要分析數(shù)據(jù),，需要跟廠家聯(lián)系,。

13.如果陰性對(duì)照和陽性對(duì)照均正常，則實(shí)驗(yàn)有效,，可以進(jìn)入后續(xù)分析,。

14.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,，再推算出其濃度,。

15.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽性或陰性,，則陰性對(duì)照 Ct 必須沒有讀數(shù),， 或者大于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于 40。對(duì)待測(cè)樣品,，如果其 Ct 沒有讀數(shù),、大于或等于 40 則均為陰性，如果小于40 則為陽性,。

選擇我們的小韋榮球菌探針法熒光PCR試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！