目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T番茄潰瘍病菌（Cmm）熒光PCR檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/盒 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-D-0499 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Clavibacter michiganensis ssp. michiganensis Probe |
| 保存條件 | -20℃±5℃,，避光保存 | 有效期 | 12個月 |
產(chǎn)品簡介：
番茄潰瘍病菌（Clavibacter michiganensis ssp. michiganensis）是由密執(zhí)安棒桿菌密執(zhí)安亞種引起的一種重要的細菌病害，還沒有快速有效的防治辦法,。番茄潰瘍病菌主要通過種子帶菌實現(xiàn)遠距離傳播,，主要癥狀表現(xiàn)為葉片壞死、莖稈開裂,、潰瘍,、植株整株枯死等。該病菌主要寄主是番茄,，還侵染辣椒,、龍葵、煙草等 47 種茄科植物,，但無侵染馬鈴薯的記錄,，對農作物健康造成較大威脅。因此快速檢測番茄潰瘍病菌具有重要的意義,。為此,，本公司以探針法PCR技術為基礎開發(fā)了番茄潰瘍病菌的檢測試劑盒。
產(chǎn)品特點：
一,、嚴格的質控體系
所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質量，讓您的檢測結果更可信,。
二,、高靈敏度
產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的番茄潰瘍病菌核酸,，不放過任何潛在的感染風險。
三,、便捷操作
綜合各項指標特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手,。
四、多樣的檢測驗證樣本
該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于葉片,、莖稈等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求,。
五,、個性化定制服務
專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調整,，為您提供更貼合實際的檢測方案,。
六、豐富的產(chǎn)品線
除了番茄潰瘍病菌（Cmm）熒光PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領域的檢測需求。
七,、完善的售前售后服務
我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊,，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂,。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品規(guī)格
50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。
檢測方法
實時熒光PCR,，具有快速、準確,、靈敏等優(yōu)點,。
適用儀器
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。
標本采集
葉片,、莖稈。
保存和運輸
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h,；若需長期保存,，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次,。
使用方法：
一,、稀釋標準曲線樣品（以 1E1-1E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本
試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1.標記 6 個離心管,，分別為 6,、5、4,、3,、2、1,。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,，最好用帶芯槍頭，下同）,。
3.在 6 號管中加入 5 μL 1E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
4.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。
5.換槍頭,，在 4 號管中加入 5 μL 1E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
6.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品,。放冰上待用,。二、樣品 DNA 的制備
7.如果有 N 個樣品,，最好設置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），
一個是 NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?10 μL 上步所得第 4 號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣,，以此作為 PC。另外用水作為 NC,。
8.用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA-提取試劑盒兼容，也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑,。
三,、Probe qPCR 反應（20 μL 體系，在樣品制備室進行）
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復,，則標記 N+9 個PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標準曲線,。如果做定性分析并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照（直接用第 6 步第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）,。下面只以定量分析為例描述操作步驟,。
10.在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢
后才設置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：
成分樣品管
N+2 個PCR
陰性對照標準曲線樣品管
（1-6 管）
2×Probe qPCR MasterMix各 10 μL10 μL各 10 μL
番茄潰瘍病菌
qPCR 引物-探針混合液各 3 μL3 μL各 3 μL
N+2 個待測 DNA 樣本各 7 μL不加不加
超純水不加7 μL不加
第 6 步所得標準曲線
樣品稀釋液（1-6 號）不加不加各 7 μL（2 號樣
到 2 號管,，3 號樣到 3 號管…）
11.蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 qPCR：
四,、數(shù)據(jù)處理
12.如果樣本制備陽性對照或 PCR 陽性對照(包括標曲樣本)結果為陰性,，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù),，需要重新樣本制備,，重新進行 PCR 擴增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對照或 PCR 陰性對照結果為陽性,，說明環(huán)境污染,，則整個實驗無效， 不需要分析數(shù)據(jù),，需要跟廠家聯(lián)系,。
13.如果陰性對照和陽性對照均正常，則實驗有效,，可以進入后續(xù)分析,。
14.如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸,，繪制標準曲線,。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度,。
15.如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須沒有讀數(shù),， 或者大于或等于 40,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴增曲線,，Ct 值應該小于 40。對待測樣品,，如果其 Ct 沒有讀數(shù),、大于或等于 40 則均為陰性，如果小于40 則為陽性,。
注意事項：
1.所有操作嚴格按照說明書進行,；
2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心,；
3.反應液應避光保存,；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；
5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染,；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理,。
9.本產(chǎn)品僅供科研,。
選擇我們的番茄潰瘍病菌（Cmm）熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！
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