目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T轉(zhuǎn)基因大米Bt(CryAc)基因PCR檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/盒 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-D-0609 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Transgenic Rice Bt (CryAc) Gene Detection Kit |
| 保存條件 | -20℃±5℃,，避光保存 | 有效期 | 12個月 |
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒適用于檢測轉(zhuǎn)基因大米 Bt（CryAc)基因,，用于篩查待檢測植物中是否含有 CryAc 成分,。其檢測結(jié)果僅供參考。
產(chǎn)品特點：
一,、嚴格的質(zhì)控體系
所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信,。
二,、高靈敏度
產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的轉(zhuǎn)基因大米Bt核酸,，不放過任何潛在的感染風險。
三,、便捷操作
綜合各項指標特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手。
四,、多樣的檢測驗證樣本
該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于固體樣本等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求,。
五,、個性化定制服務
專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實際的檢測方案,。
六,、豐富的產(chǎn)品線
除了轉(zhuǎn)基因大米Bt(CryAc)基因PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求,。
七,、完善的售前售后服務
我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品規(guī)格
50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。
檢測方法
實時熒光PCR,，具有快速、準確,、靈敏等優(yōu)點,。
適用儀器
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P,、MJ Opticon2,、LightCycler480,、Bio-Rad,、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
標本采集
稱取 200g 樣品,。
保存和運輸
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h,；若需長期保存，應放置-70℃以下保存,，凍融不超過 3 次,。
使用方法：
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
固體樣本：用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀,。
1.2DNA 提取
對于固體標本,，DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法：
1)每個樣品取 2 個平行管,。稱取 200mg 粉碎的樣品，加入 1mL 預冷至 4℃的抽提液,，劇烈搖動混勻后,，在冰上靜止 5min,，4℃條件下10000g 離心 15min,，棄上清液；
2)加入 600uL 預熱至 65℃的裂解液，充分重懸沉淀,，在 65℃恒溫保持 40min,，期間顛倒混勻 5 次,；
3)室溫條件下 10000g 離心 10min，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中,，加入 5uLRNAseA,，37℃恒溫 30min,，分別用等體積苯-酚：異戊醇溶液和三氯jia烷：異戊醇溶液各抽提一次,；
4)室溫條件下,，10000g 離心10min,，取上清液至新離心管,，加入三分之二體積的異丙醇,，十分之一體積的3mol/L 的乙酸鈉溶液（pH=6.5），
-20℃放置 2-3h,；
5)在 4℃條件下，10000g 離心 15min,，棄上清液,，用 70%乙醇洗滌沉淀一次，倒出乙醇,，晾干沉淀,；
6)加入 50uL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA-提取試劑盒,。
油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA-提取試劑盒,，按說明操作
2.試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設所需要的PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份,，多配制 1 份)， 每測試反應體系配制如下表：
試劑CryAc 反應液酶液
用量20μL1μL
3.加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,，加入相應的反應管中，蓋好管蓋,，混勻，短暫離心,。
4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi),；
4.2設置好通道、樣品信息,，反應體系設置為 25ul,；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye） 選擇 NONE,，請勿選擇 ROX 參比熒光,。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置：
步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號
11 cycle95℃10min否
240 cycles94℃15sec否
55℃30sec是
5.結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),，重新分析結(jié)果,。
5.2結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38,，建議重復檢測,，如果檢測通道仍為 35
6.檢測方法的局限性
6.1樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理,、運送以及保存質(zhì)量有關；
6.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；
6.3陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導致假陽性結(jié)果,；
6.4病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導致假陰性結(jié)果,；
6.5不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結(jié)果,；
6.6試劑運輸,，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果,；
6.7本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
7.質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足,，否則實驗視為無效,。
注意事項：
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化,，完-全混勻并短暫離心,；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊,；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；
6.樣本處理,、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,，以免交叉污染,；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理,。
9.本產(chǎn)品僅供科研,。
選擇我們的轉(zhuǎn)基因大米Bt(CryAc)基因PCR檢測試劑盒，就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！
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