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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒適用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的 SPS 基因，用于篩查待檢測植物中是否含有SPS 成分,。其檢測結(jié)果僅供參考,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一,、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測結(jié)果更可信,。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的水稻內(nèi)源基因SPS核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)。

三,、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手。

四,、多樣的檢測驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗(yàn)證,，適用于固體樣本等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求,。

五,、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實(shí)際的檢測方案,。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了水稻內(nèi)源基因SPS核酸檢測試劑盒(熒光PCR法),，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì),，在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實(shí)時(shí)熒光PCR,，具有快速、準(zhǔn)確,、靈敏等優(yōu)點(diǎn),。

適用儀器

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P,、MJ Opticon2,、LightCycler480、Bio-Rad,、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

標(biāo)本采集

稱取 200g 樣品,。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h；若需長期保存,，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

固體樣本：用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀,。

1.2DNA 提取

對(duì)于固體標(biāo)本,，DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法：

1)每個(gè)樣品取 2 個(gè)平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,，加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液,，劇烈搖動(dòng)混勻后，在冰上靜止 5min,，4℃條件下 10000g 離心 15min,，棄上清液；

2)加入 600uL 預(yù)熱至 65℃的裂解液,，充分重懸沉淀,，在 65℃恒溫保持 40min， 期間顛倒混勻 5 次,；

3)室溫條件下10000g 離心10min,，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，加入5uLRNAseA,， 37℃恒溫 30min,，分別用等體積苯-酚：異戊醇溶液和三氯jia烷：異戊醇溶液各抽提一次；

4)室溫條件下,，10000g 離心 10min,，取上清液至新離心管，加入三分之二體積的異丙醇,，十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液（pH=6.5）,，-20℃放置 2-3h；

5)在 4℃條件下,，10000g 離心 15min,，棄上清液，用 70%乙醇洗滌沉淀一次,，倒出乙醇,，晾干沉淀；

6)加入 50uL TE（pH8.0）溶解沉淀,，所得溶解即為樣品 DNA 溶液,。也可使用等效的 DNA-提取試劑盒。

油脂樣本請(qǐng)直接選用市售油脂 DNA-提取試劑盒,，按說明操作,。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；樣品每滿 7 份,，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑SPS 反應(yīng)液酶液

用量20μL1μL

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μL，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻，短暫離心,。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul,；熒光通道選擇： 檢測通道

（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）選擇 NONE,，請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),，重新分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38,，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值

≤38,，且曲線有明顯的增長曲線,，判定為陽性，否則為陰性,； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效,。

7.檢測方法的局限性

7.1樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理,、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

7.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

7.3陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

7.4病原體在流行過程中基因突變、重組,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

7.5不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

7.6試劑運(yùn)輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

7.7本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的水稻內(nèi)源基因SPS核酸檢測試劑盒(熒光PCR法),，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！