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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒適用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的Rice601 基因,，用于篩查待檢測植物中是否含有 Rice601 成分。其檢測結(jié)果僅供參考,。

產(chǎn)品特點：

一,、嚴格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測結(jié)果更可信,。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE601核酸，不放過任何潛在的感染風(fēng)險,。

三,、便捷操作

綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手,。

四,、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證，適用于固體樣本等多種常見樣本,，滿足不同的檢測需求,。

五、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六,、豐富的產(chǎn)品線

除了轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE601核酸PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求,。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊,，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速,、準確,、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P,、MJ Opticon2、LightCycler480,、Bio-Rad,、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

稱取 200g 樣品,。

保存和運輸

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月,，標本運送應(yīng)采用 0℃冰壺,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

固體樣本：用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。

1.2DNA 提取

對于固體標本,，DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法：

1)每個樣品取 2 個平行管,。稱取 200mg 粉碎的樣品，加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液,，劇烈搖動混勻后,，在冰上靜止 5min，4℃條件下10000g 離心 15min,，棄上清液,；

2)加入 600uL 預(yù)熱至 65℃的裂解液，充分重懸沉淀,，在 65℃恒溫保持 40min,，期間顛倒混勻 5 次；

3)室溫條件下 10000g 離心 10min,，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中,，加入 5uLRNAseA，37℃恒溫 30min,，分別用等體積苯-酚：異戊醇溶液和三氯jia烷：異戊醇溶液各抽提一次,；

4)室溫條件下,，10000g 離心10min，取上清液至新離心管,，加入三分之二體積的異丙醇,，十分之一體積的3mol/L 的乙酸鈉溶液（pH=6.5），

-20℃放置 2-3h,；

5)在 4℃條件下,，10000g 離心 15min，棄上清液,，用 70%乙醇洗滌沉淀一次,，倒出乙醇，晾干沉淀,；

6)加入 50uL TE（pH8.0）溶解沉淀,，所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA-提取試劑盒,。

油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA-提取試劑盒,，按說明操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；樣品每滿 7 份，多配制 1 份),， 每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑Rice601 反應(yīng)液酶液

用量20μL1μL

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA,、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋，混勻,，短暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道,、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye） 選擇 NONE,，請勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),，重新分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38,，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線,，判定為陽性，否則為陰性,； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.檢測方法的局限性

6.1樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理,、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

6.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

6.3陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

6.4病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.5不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.6試劑運輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果,；

6.7本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7.質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實驗視為無效,。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染,；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理,。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE601核酸PCR檢測試劑盒，就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！