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產品簡介：

本試劑盒適用于檢測水樣糞便,，疑似污染的水,、食物等樣本中的霍亂弧菌 O139，用于霍亂弧菌 O139 感染的輔助診斷,，其檢測結果僅供參考,。

產品特點：

一、嚴格的質控體系

所有試劑盒從原料到成品都經過嚴格的質量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質量,，讓您的檢測結果更可信。

二,、高靈敏度

產品經過不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的霍亂弧菌O139核酸，不放過任何潛在的感染風險,。

三,、便捷操作

綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結果分析,，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手,。

四,、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經過多種樣本的檢測驗證，適用于水樣糞便,，疑似污染的水,、食物等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求,。

五,、個性化定制服務

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據您的特殊需求進行產品優(yōu)化和調整,，為您提供更貼合實際的檢測方案,。

六、豐富的產品線

除了霍亂弧菌O139（VC O139）熒光PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領域的檢測需求。

七,、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊,，在您購買前為您提供詳細的產品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂,。

產品參數：

產品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實時熒光PCR,，具有快速、準確,、靈敏等優(yōu)點,。

適用儀器

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

標本采集

水樣便取 0.5~1mL,；疑似污染的食物取 1g,。

保存和運輸

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個月,，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸， 嚴禁反復凍融,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

水樣便 13000rpm 離心 2min,，去盡上清；疑似污染的食物用手術-剪剪碎混勻后取 0.05g 于研磨器中研磨,， 加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min,，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,；疑似污染的水直接取 100μL

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請    按照試劑說明書進行操作,。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據待檢測樣本總數,，設所需要的 PCR 反應管管數為 N（N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數每滿 10 份,，多配制 1 份）,，每測試反應體系配制如下表：

試劑VC O139 反應液酶液

用量（樣本數為 N）20μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21μL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品,、陰性質控品各取 4μL,，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋,，混勻,， 短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內,；

4.2設置好通道,、樣品信息，反應體系設置為 25μL,；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數設置：

步驟循環(huán)數溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時,，根據分析后圖像調節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內調節(jié)）,、stop 值（一般可在 5~20 范圍內調節(jié)）,，以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動閾值線至高于陰性對照），重新分析結果,。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38,，建議重復檢測,，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線,， 判定為陽性,，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

6.質控標準

陰性質控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應同時滿足,，否則實驗視為無效。

7.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結果與樣本收集,、處理,、運送以及保存質量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現假陽性結果,；

3.陽性對照、擴增產物泄漏,，會導致假陽性結果,；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導致假陰性結果,；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果,；

6.試劑運輸,，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果,；

7.本檢測結果僅供參考,，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行,；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存,；

4.反應中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理,、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,，以免交叉污染,；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理,。

9.本產品僅供科研。

選擇我們的霍亂弧菌O139（VC O139）熒光PCR檢測試劑盒,，就是選擇精準,、高效、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護航,！