目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T瘟病毒屬（Pestivirus）熒光PCR檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/盒 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-D-0378 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Pestivirus Detection Kit |
| 保存條件 | -20℃±5℃,，避光保存 | 有效期 | 12個月 |
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒適用于檢測拭血液樣本和組織臟器中瘟病毒屬類病毒（牛病毒性腹瀉病毒,、豬瘟病毒和羊邊界病毒等）RNA,，適用于瘟病毒屬類病毒感染的診斷,、檢疫、檢測,、監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查等,。
產(chǎn)品特點：
一、嚴格的質(zhì)控體系
所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測結(jié)果更可信,。
二,、高靈敏度
產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的瘟病毒屬核酸,，不放過任何潛在的感染風險。
三,、便捷操作
綜合各項指標特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手,。
四、多樣的檢測驗證樣本
該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于血液等多種常見樣本,，滿足不同的檢測需求。
五,、個性化定制服務(wù)
專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實際的檢測方案,。
六,、豐富的產(chǎn)品線
除了瘟病毒屬（Pestivirus）熒光PCR檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求,。
七、完善的售前售后服務(wù)
我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊,，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂,。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品規(guī)格
50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。
檢測方法
實時熒光PCR,，具有快速,、準確、靈敏等優(yōu)點,。
適用儀器
ABI7500,、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
標本采集
內(nèi)臟樣品：采取病死豬各種臟器(淋巴結(jié),、胰臟,、脾臟、回腸,、肝臟和腎臟)裝入一次性塑料袋或其他滅菌容 器,，編號，送實驗室,。
4%EDTA 抗凝血：用無菌-注射器直接全血,，注入含 1/10 4%EDTA 溶液的無菌容器中,，充分混勻后編號備用。
保存和運輸
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h,；若需長期保存,，應(yīng)放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次,。
使用方法：
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
內(nèi)臟樣品：取 50mg~100mg 待檢樣品,，按 1:5 倍體積加入 DEPC 水，于研缽或組織勻漿器中充分研磨,，
3000g 離心離心 15 min,，取上清液轉(zhuǎn)入離心管中編號備用。
1.2核酸提取
推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取,， 請按照試劑說明書進行操作,。
2.試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份,，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑Pestivirus 反應(yīng)液酶液內(nèi)標質(zhì)控
用量18μL1μL1μL
將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，20μL/管,。
3.加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,， 短暫離心。
4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；
4.2設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；熒光通道選擇：
檢測通道（ReporterDye）FAM,、VIC，淬滅通道（QuencherDye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號
11 cycle50℃10min否
21 cycle95℃2min否
345 cycles95℃15sec否
60℃30sec是
5.結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請參照各儀器使用說明書進行設(shè)置,，以分析 ABI7500 儀器為例）
反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整,，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期,，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線）,，點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
FAM 通道為瘟病毒屬檢測結(jié)果,，VIC 通道為內(nèi)標檢測結(jié)果陽性：檢測通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值,，且無特異性擴增曲線,；
可疑：樣本檢測結(jié)果 40＜Ct 值≤45，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為 40<Ct 值≤45,，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性,，否則為陰性,。
5.3質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期,，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效,。
6.檢測方法的局限性
1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān),；
2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
3.陽性對照,、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
4.病原體在流行過程中基因突變,、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；
6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果,；
7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段,。
注意事項：
1.所有操作嚴格按照說明書進行,；
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心；
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；
6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行,，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。
9.本產(chǎn)品僅供科研,。
選擇我們的瘟病毒屬（Pestivirus）熒光PCR檢測試劑盒,，就是選擇精準、高效,、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護航！
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