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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

西尼羅河病毒（West Nile virus,，WNV）是一種不分節(jié)段的單股正鏈 RNA 病毒,，屬于黃病毒科黃病毒屬， 可引起人畜共患疾病,。該病毒最早發(fā)現(xiàn)于烏干達(dá),，由于在西尼羅河地區(qū)分離得到，故而得名,。該病毒的主要傳染源為野生鳥(niǎo)類(lèi),，傳播媒介為庫(kù)蚊。病毒在鳥(niǎo)類(lèi)體內(nèi)高濃度循環(huán),，產(chǎn)生病毒血癥,，使大批蚊子感染，然后通過(guò)蚊子叮咬傳播給鳥(niǎo),、人類(lèi)和某些哺乳動(dòng)物,。目前對(duì)于 WNV 感染臨床診斷主要采用血清學(xué)和病毒學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。血清學(xué)檢測(cè)由于 WNV 與日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,，JEV）等存在交叉反應(yīng),，降低了臨床診斷的準(zhǔn)確性。病毒學(xué)主要采用病毒培養(yǎng)法,，準(zhǔn)確性較高,，但時(shí)效性低。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 逐漸被應(yīng)用于臨床診斷,。

本試劑盒適用于檢測(cè)的疑似感染動(dòng)物或人的靜脈血等標(biāo)本中西尼羅河病毒 RNA，適用于西尼羅河病毒感染的輔助診斷,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一,、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測(cè)結(jié)果更可信,。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過(guò)不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測(cè)到極微量的西尼羅河病毒核酸,，不放過(guò)任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)。

三,、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手。

四,、多樣的檢測(cè)驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過(guò)多種樣本的檢測(cè)驗(yàn)證,，適用于靜脈血等多種常見(jiàn)樣本，滿足不同的檢測(cè)需求,。

五,、個(gè)性化定制服務(wù)

專(zhuān)業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實(shí)際的檢測(cè)方案,。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了西尼羅河病毒(WNV)熒光PCR檢測(cè)試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專(zhuān)業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì),，在您購(gòu)買(mǎi)前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢(xún)和技術(shù)支持，購(gòu)買(mǎi)后為您解決使用過(guò)程中遇到的任何問(wèn)題,，讓您無(wú)后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求,。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR,，具有快速、準(zhǔn)確,、靈敏等優(yōu)點(diǎn),。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

標(biāo)本采集

疑似感染動(dòng)物或人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò) 24 h,；若需長(zhǎng)期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過(guò) 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱(chēng)取樣品約 1g,，手術(shù)-剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,，加入1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,，8000rpm 離心 2min,，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；咽-拭子樣品直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取試劑（離心柱法）進(jìn)行核酸提取,，請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)    進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照,；樣品每滿

10 份，多配制 1 份),，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑WNV 反應(yīng)液酶液

用量（樣本數(shù)為 N）19μL1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽(yáng)性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻， 短暫離心,。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇

ROX 參比熒光,，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行設(shè)置,，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶(hù)可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線）,，點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>40 或無(wú) Ct 值,。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效,。

6.檢測(cè)方法的局限性

1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集,、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

2.樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；

3.陽(yáng)性對(duì)照,、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

4.病原體在流行過(guò)程中基因突變,、重組,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段,。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專(zhuān)用工作服,；

6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的西尼羅河病毒(WNV)熒光PCR檢測(cè)試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！