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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

肝片吸蟲屬于吸蟲綱片形科的 1 種寄生蟲,。除侵害牛、羊外,，也可感染馬,、驢,、駝、狗,、貓,、豬、兔,、鹿以及多種野生動(dòng)物和人,。中國(guó)各地廣泛存在。蟲體扁平葉狀,，長(zhǎng) 20～25 毫米,，寬 8～13 毫米?？谖P位于體前端,， 腹吸盤位于前端腹面，口孔開口于口吸盤,。肝片吸蟲幼蟲期在螺體內(nèi)進(jìn)行大量的無(wú)性繁殖,，然后大量逸出。肝片吸蟲幼蟲期穿破肝表膜,，引起肝損傷和出血,。蟲體的刺激使膽管壁增生，可造成膽管阻塞,、肝實(shí)質(zhì)變性,、黃疸等。分泌毒素具有溶血作用,。肝片吸蟲攝取宿主的養(yǎng)分,，引起營(yíng)養(yǎng)狀況惡化，幼畜發(fā)育受阻,，肥育度與泌乳量下降,，危害很大。

本試劑盒適用于糞便樣本和組織樣本,，用于肝片吸蟲感染的輔助診斷,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測(cè)結(jié)果更可信。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過(guò)不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度，能夠檢測(cè)到極微量的肝片吸蟲核酸，不放過(guò)任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn),。

三,、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手,。

四、多樣的檢測(cè)驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過(guò)多種樣本的檢測(cè)驗(yàn)證,，適用于糞便樣本和組織樣本等多種常見樣本,，滿足不同的檢測(cè)需求。

五,、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實(shí)際的檢測(cè)方案,。

六,、豐富的產(chǎn)品線

除了肝片吸蟲（FH）熒光PCR檢測(cè)試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求,。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì),，在您購(gòu)買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購(gòu)買后為您解決使用過(guò)程中遇到的任何問題，讓您無(wú)后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR,，具有快速,、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn),。

適用儀器

ABI7500,、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

標(biāo)本采集

糞便樣品：采集疑似患病的動(dòng)物糞便樣品 10 g ,。組織樣品：采集動(dòng)物肝臟內(nèi)的可疑蟲體片段組織,。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò) 24 h；若需長(zhǎng)期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過(guò) 3 次,。

使用方法：

1.樣品處理和核酸提取（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：將動(dòng)物肝臟內(nèi)發(fā)現(xiàn)的可疑蟲體片段組織先用 PBS 液反復(fù)沖洗,，再用雙蒸水沖洗 2~3 次,取 25 mg 樣品剪碎,。加 500μL PBS 液進(jìn)行研磨，上清即為待提取核酸的樣品,。

糞便樣品：糞便樣品中加水適量,，攪拌均勻制成混懸液，用金屬篩或紗布過(guò)濾,，去除糞渣,，過(guò)濾液靜置 15min 或 3000r/min 離心 10min，傾去上清液,，可如此反復(fù)操作,，直至上清液較為透明，最后棄去上層液體,。加入 250μL 滅菌 ddH2O 中,，95℃煮沸 10 min，上清即為待提取核酸的樣品,。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取,，請(qǐng)   按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照,；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份）,，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑FH 反應(yīng)液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽(yáng)性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻，短暫離心,。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇

ROX 參比熒光,，選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)器，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線）,，點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值，且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線,；

可疑：樣本檢測(cè)結(jié)果 40＜Ct 值≤45,，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 40<Ct 值≤45,，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,，判定為陽(yáng)性，否則為陰性,。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示,；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

6.檢測(cè)方法的局限性

1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集,、處理,、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過(guò)程中沒有控制好交叉污染,，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,；

3.陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果,；

4.病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.試劑運(yùn)輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段,。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理,、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染,；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理,。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的肝片吸蟲（FH）熒光PCR檢測(cè)試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！