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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒適用于檢測皮膚結(jié)節(jié),、動物組織樣本及其他類型樣品中的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒,，用于牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒感染的輔助診斷。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一,、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信,。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的牛結(jié)節(jié)性皮膚病核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)。

三、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手,。

四、多樣的檢測驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗(yàn)證,，適用于皮膚,、肺、脾臟,，淋巴結(jié),、肌肉等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求,。

五,、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實(shí)際的檢測方案,。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙SDV）熒光PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求,。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì)，在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實(shí)時(shí)熒光PCR，具有快速,、準(zhǔn)確,、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

適用儀器

ABI7500,、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

標(biāo)本采集

皮膚結(jié)節(jié)采集：用 0.1mol/L PBS(pH=7.4) 清洗皮膚結(jié)節(jié)表面,，然后用滅菌手術(shù)-剪刀剪取結(jié)節(jié)，2g~5g 為宜,。采集到的皮膚結(jié)節(jié)裝入樣品保存管,，加 10%甘油 PBS 保存液，使保存液液面沒過樣品,，加蓋封口,，冷凍保存。

組織樣品采集：除皮膚結(jié)節(jié)外,，在活體檢查或死后剖檢,，可采集淋巴、病變肺部組織,、脾,、臟器上的病變結(jié)節(jié)及病灶周圍組織 2g~5g，裝入樣品保存管,，加 10%甘油 PBS 保存液,，使保存液液面沒過樣品，加蓋封口,， 冷凍保存,。

其他樣品采集可參照 GB/T 39602-2020。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h,；若需長期保存,，應(yīng)放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

取采集的臨床樣品,，包括皮膚、肺,、脾臟,，淋巴結(jié)、肌肉等,，取 2~5g 組織樣品切成小塊,，加入 5ml~10ml 預(yù)冷 PBS 緩沖液勻漿 2min，制成懸液,，反復(fù)凍融 3 次，4℃ 12000g 離心 10min,，吸取 200μL 上清進(jìn)行核酸提取,。

其他樣品前處理可參照 GB/T 39602-2020。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取試劑（離心柱法）進(jìn)行核酸提取,，請按照試劑說明書進(jìn)    行操作,。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿

10 份,，多配制 1 份),，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑LSDV 反應(yīng)液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋，混勻,， 短暫離心,。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道,、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光，選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請參照各儀器使用說明書進(jìn)行設(shè)置,，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整,，Start 值可設(shè)在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期,，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值,。

如果把本試劑盒用于定量檢測,，則陽性質(zhì)控做稀釋標(biāo)曲，以陽性質(zhì)控濃度的 log 值為橫軸,，以 CT 值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 CT 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,，再推算出其濃度 ,。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無特異性擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理,、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

3.陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運(yùn)輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

7.本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙SDV）熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準(zhǔn),、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！