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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

口蹄疫病是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth Disease Virus, FMDV）引起偶蹄動(dòng)物的一種急性,、熱性、高度接觸性傳染病,，是我國農(nóng)業(yè)部公布的一類動(dòng)物疫病,。牛，豬最易感染 FMDV,，羊,、駱駝、象等均有發(fā)病報(bào)告,。該病可分為 O,、A、C,、南非 I 型,、南非 II 型、南 III 型和亞洲 I 型等血清型,，其中以 O 型和 A 型分布最-廣,，危害最大。

本試劑盒適用于檢測(cè)樣本中 O 型口蹄疫病毒 RNA,，適用于 O 型口蹄疫病毒感染的輔助診斷,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測(cè)結(jié)果更可信,。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度,，能夠檢測(cè)到極微量的口蹄疫病毒O型核酸，不放過任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn),。

三,、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手,。

四,、多樣的檢測(cè)驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測(cè)驗(yàn)證，適用于淋巴結(jié),、脊髓,、扁桃體、心臟肌肉,、骨胳肌等多種常見樣本,，滿足不同的檢測(cè)需求。

五,、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實(shí)際的檢測(cè)方案,。

六,、豐富的產(chǎn)品線

除了口蹄疫病毒O型(FMDV-O)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求,。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì),，在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求,。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR,，具有快速、準(zhǔn)確,、靈敏等優(yōu)點(diǎn),。

適用儀器

ABI7500,、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

標(biāo)本采集

病死或撲殺動(dòng)物,，取淋巴結(jié),、脊髓、扁桃體,、心臟肌肉,、骨胳肌等組織和水泡皮、水泡液,；待檢活動(dòng)物,，采   集動(dòng)物血液 5ml 至無菌離心管，反芻動(dòng)物可取 O/P 液 2~3mL,。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h,；若需長(zhǎng)期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過 3 次,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣本：將采集的動(dòng)物機(jī)體組織，置組織勻漿器中充分研磨,，加入青霉-素 1 000 IU/mL,、鏈霉-素 500 IU/mL， 

0.04 mol/L PBS(pH 7.4)制成 1:5 的組織懸液,，4℃浸毒過夜,。次日以 3000 r/min 離心 10 min，取上清液備用,；水泡皮樣品：稱取水泡皮0.5g 于研磨器中研磨,，加入生理鹽水繼續(xù)研磨,，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL 滅菌離心管中,，8000rpm離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,；水泡液樣品,，以 3000 r/min 離心 10 min，取上清液備用,； OP 液：將 O-P 液倒入滅菌塑料離心管內(nèi),，再加入不少于樣品 1/3 體積量的三氯三氣乙燒或氯仿。用高速組織勻漿機(jī)以 10 000 r/min 攪拌 3 min，然后以 3 000 r/min 離心 10min,，此時(shí)液體分成兩相，將上層水相分裝入樣品保存管中備用,。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（離心柱法）進(jìn)行核酸提取,，請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份,，多配制 1 份),，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑FMDV-O 反應(yīng)液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,，短暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；熒光通道選擇：

檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光,， 選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycle95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說明書進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期,，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線）,，點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值,。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無特異性擴(kuò)增曲線或無 Ct 值；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，且Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效,。

6.檢測(cè)方法的局限性

1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集,、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對(duì)照,、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變,、重組,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段,。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的口蹄疫病毒O型(FMDV-O)熒光PCR檢測(cè)試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！