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產(chǎn)品簡介：

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome, PRRS）,，又稱藍(lán)耳病,，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起豬的高度接觸性傳染病,，我國列為二類傳染病,。該病的主要臨床特征為：厭食,，發(fā)熱，母豬    流產(chǎn),、產(chǎn)死胎,、產(chǎn)弱胎和木乃伊胎以及各種年齡豬呼吸困難,。根據(jù)基因型和抗原性的差異,，PRRSV 通常被分為歐洲型和美洲型，我國主要流行的是美洲型 PRRSV,，但近幾年我國多地區(qū)也相繼分離到歐洲型 PRRSV,。

本試劑盒適用于檢測肺,、扁桃體和口腔拭子,、全血等標(biāo)本中豬藍(lán)耳病病毒 RNA,，適用于豬藍(lán)耳病病毒感染的輔助診斷,。

產(chǎn)品特點：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的豬藍(lán)耳病病毒通用型核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險,。

三,、便捷操作

綜合各項指標(biāo)特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手,。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于肺、扁桃體和口腔拭子、全血等多種常見樣本,，滿足不同的檢測需求。

五,、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實際的檢測方案,。

六,、豐富的產(chǎn)品線

除了豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)熒光PCR試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求,。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊,，在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速,、準(zhǔn)確,、靈敏等優(yōu)點,。

適用儀器

ABI7500,、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標(biāo)本采集

病死或撲殺豬,，取肺臟、淋巴結(jié),、扁桃體、脾臟等組織；待檢活豬,，取口腔拭子或取血 5mL；公豬可采集精液,。

血清樣品采集：用無菌-注射器抽取受檢豬靜脈血不少于 5mL,，置于無菌離心管內(nèi),，2000r/min~3000r/min 離

心 10min,，吸取上清液到新的離心管內(nèi)備用。公豬精液：按照 GB/T25172-2020 的方法采集和保存精液,。口腔拭子：大豬使用保定器保定,，小豬可以雙手保定，用采樣拭子蘸取口腔分泌物,，放入無菌采樣管中。肺灌洗液：完    整摘取肺臟/肺葉,，送實驗室進行灌洗。組織樣品：取肺臟,、淋巴結(jié),、扁桃體,、脾臟等組織,，置于無菌離心管內(nèi)備用,。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h,；若需長期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過 3 次,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

血清和精液樣品：無需進行前處理，直接用于核酸提??；口腔拭子樣品：加入 500μL 無菌 PBS，充分渦旋震蕩 1min,，反復(fù)擠壓拭子,，棄去拭子后 3000r/min 離心 5min，取上清用于后續(xù)的核酸提取,。肺灌洗液：根據(jù)肺臟/肺葉的大小,，通過肺管加入 5mL~10mL 無菌 PBS,，反復(fù)揉捏，吸取灌洗液,，3000r/min 離心 5 min，取上清用于核酸提取,。組織樣品：取 1g 組織,，剪碎，加人 2mL 生理鹽水進行研磨,，制備組織勻漿，8000r/min 離心 5min,， 取上清用于后續(xù)的核酸提取,。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請    按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份,，多配制 1 份）,，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑PRRSV-U 反應(yīng)液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻，短暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；熒光通道選擇：檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請參照各儀器使用說明書進行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線）,，點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值,。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理,、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

7.本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,，以免交叉污染,；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理,。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的豬藍(lán)耳病病毒通用型(PRRSV-U)熒光PCR試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！