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產(chǎn)品簡介：

副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, HPS）常引起豬的多發(fā)性漿膜炎,、關(guān)節(jié)炎以及腦膜炎,，該菌引起的病叫副豬嗜血桿菌病,，又稱為豬格拉澤氏病。本菌可感染2周齡-4月齡的豬發(fā)病,，5-8周的斷奶后和保育階段豬多發(fā),，發(fā)病率一般在10％-15％，嚴(yán)重時(shí)死亡率可達(dá)50％,。感染豬臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱,、呼吸困難、關(guān)節(jié)腫脹,、跛行、皮膚及粘膜發(fā)紺,、耳尖發(fā)紫,，站立困難甚至癱瘓。建立早期快速檢測方法對(duì)副豬嗜血桿菌感染的預(yù)防和控制具有十分重要的意義,。

本試劑盒適用于檢測氣管分泌物拭子,、肺組織、關(guān)節(jié)液等樣本中的副豬嗜血桿菌,，用于副豬嗜血桿菌感染的輔助診斷,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的副豬嗜血桿菌核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn),。

三、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手,。

四,、多樣的檢測驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗(yàn)證，適用于肺病變部位或病變/非病變部位交界處的樣品,；生豬滅菌棉拭子沾取氣管分泌物等多種常見樣本,，滿足不同的檢測需求。

五,、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實(shí)際的檢測方案,。

六,、豐富的產(chǎn)品線

除了副豬嗜血桿菌(HPS)檢測試劑盒(熒光PCR法)，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求,。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì),，在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實(shí)時(shí)熒光PCR,，具有快速,、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn),。

適用儀器

ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標(biāo)本采集

病死或撲殺豬,，無菌采集肺病變部位或病變/非病變部位交界處的樣品,；生豬滅菌棉拭子沾取氣管分泌物，放入無菌試管中,；若有關(guān)節(jié)囊腫,，在囊腫表面常規(guī)碘-酊消毒,，用2mL或5mL滅菌注射器穿刺，無菌吸取1~2mL關(guān)節(jié)滲出液,。

保存和運(yùn)輸

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月,，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,， 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g,，手術(shù)-剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,，8000rpm離心2min,，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；關(guān)節(jié)滲出液,，直接取100μL進(jìn)行提取,。

1.2DNA提取 

1)DNA的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA-提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照；樣品每滿7份,，多配制1份),，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑HPS反應(yīng)液酶液

用量（樣本數(shù)為N）20μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中，21uL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的DNA,、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,，短暫離心。

4.PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL,；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline和Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),，以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道Ct值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；

可疑：檢測通道35<Ct值≤38，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為35<Ct值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性,，否則為陰性,；

陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct值>38或無Ct值,；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且Ct值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無效,。

7.檢測方法的局限性

7.1樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理,、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

7.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

7.3陽性對(duì)照,、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

7.4病原體在流行過程中基因突變,、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

7.5不同的提取方法存在提取效率差異,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

7.6試劑運(yùn)輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理,、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染,；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理,。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的副豬嗜血桿菌(HPS)檢測試劑盒(熒光PCR法),，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！