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產(chǎn)品簡介：

偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,，PRV)又稱豬皰疹病毒Ⅰ型,、傳染性延髓麻痹病毒、奇癢癥病毒,、奧葉茲基氏病病毒,。是引起牛、羊,、豬,、犬和貓等多種家畜和野生動物發(fā)熱、奇癢(豬除外)及腦脊髓炎為主要癥狀的皰疹病毒,。豬是偽狂犬病的唯-一自然宿主,，對其危害大?？芍氯焉锬肛i流產(chǎn),，產(chǎn)死胎及胎兒干尸化。對初生仔豬則引起神經(jīng)癥狀,，出現(xiàn)運動失調(diào),，麻痹，衰竭死亡,，病死率 100%,。成年豬多呈隱性感染，但可引起呼吸道癥狀,。病豬,、帶毒豬及帶毒鼠類是本病的主要傳染源，病毒主要從病豬的鼻分泌物,、唾液,、乳汁和尿中排除,，有的帶毒豬可持續(xù)排毒一年。

本試劑盒利用實時熒光 PCR 原理,，檢測偽狂犬病毒,，對偽狂犬病毒引起的疾病及其并發(fā)癥的診斷及療效評估有重要指導(dǎo)意義。

產(chǎn)品特點：

一,、嚴格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信,。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的偽狂犬病毒通用型核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險。

三,、便捷操作

綜合各項指標特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手。

四,、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于腦、淋巴結(jié),、脾臟,、肺臟、鼻腔分泌物,、唾液,、乳汁等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求,。

五,、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實際的檢測方案,。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了偽狂犬病毒通用型（PRV-gH）PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊,，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR,，具有快速,、準確,、靈敏等優(yōu)點,。

適用儀器

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

標本采集

病死或撲殺的豬,，取腦、淋巴結(jié),、脾臟,、肺臟等組織；待檢活豬,，用棉拭子取鼻腔分泌物,、唾液、乳汁等,，   置于 50%甘油生理鹽水中,，或用注射器取血 5mL。

保存和運輸

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸,， 嚴禁反復(fù)凍融,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術(shù)-剪剪碎混勻后取 0. 5g 于研磨器中研磨,，加入

1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min,，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,；分泌物棉拭子直接取 100μL 提取,；血液取血清 100μL 提取,。

1.2 核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取,，請按照    試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份),，單個測試反應(yīng)液體系配制如下表：

試劑PRV-gH 反應(yīng)液酶液

用量（樣本數(shù)為 N）20μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，21μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻，短暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光,，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),，以及 Threshold 的 Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性,，否則為陰性,；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32,；以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效,。

7.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對照,、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變,、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.試劑運輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

7.本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段,。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理,、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,，以免交叉污染,；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理,。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的偽狂犬病毒通用型（PRV-gH）PCR檢測試劑盒,，就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！