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一、試劑盒概述

Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞凋亡/周期檢測(cè)試劑盒是一種用于高靈敏度檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的試劑盒,。它通過(guò) Annexin V 與磷脂酰絲氨酸（PS）的特異性結(jié)合,，結(jié)合碘化丙啶（PI）雙染技術(shù),，實(shí)現(xiàn)凋亡早晚期細(xì)胞及死細(xì)胞的精準(zhǔn)區(qū)分，適用于流式細(xì)胞術(shù)與熒光顯微鏡檢測(cè),。

二,、工作原理

• 細(xì)胞凋亡過(guò)程中的 PS 外翻：在正常細(xì)胞中，PS 位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),，細(xì)胞凋亡時(shí),，PS 會(huì)從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)，暴露于細(xì)胞外環(huán)境,。

• Annexin V 與 PS 結(jié)合：Annexin V 是一種依賴(lài) Ca2?的磷脂結(jié)合蛋白，對(duì) PS 具有高親和力,。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡,，PS 外翻至細(xì)胞膜外側(cè)時(shí)，Annexin V 可與其結(jié)合,，從而識(shí)別凋亡細(xì)胞,。

• PI 的染色作用：PI 是一種熒光核染料，不能穿透活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的完整細(xì)胞膜,，但能透過(guò)晚期凋亡和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜,，使細(xì)胞核染色。通過(guò) Annexin V 和 PI 的聯(lián)合染色,，可以區(qū)分活細(xì)胞,、早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。

三,、試劑盒組分及作用

• Annexin V 結(jié)合緩沖液（5×）：用于稀釋和重懸細(xì)胞,，為 Annexin V 與 PS 的結(jié)合提供適宜的環(huán)境，包括適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度和 pH 值等,，其成分和配比能穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，減少非特異性結(jié)合。

• Annexin V-AbFluor™ 647：是 Annexin V 與 AbFluor™ 647 熒光染料的標(biāo)記物,。AbFluor™ 647 染料具有優(yōu)異的熒光性能,，其激發(fā)波長(zhǎng)為 650nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 665nm,，相比其他類(lèi)似染料,，如 Alexa Fluor 647、Cy5,、DyLight™ 649 等,，具有更高的熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性，能更清晰地標(biāo)記凋亡細(xì)胞,。

• 碘化丙啶（PI）：PI 的激發(fā)波長(zhǎng)為 535nm,，發(fā)射波長(zhǎng)為 617nm,。活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜完整,，PI 無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),，因此細(xì)胞核不被染色；而晚期凋亡和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜失去完整性,，PI 可進(jìn)入細(xì)胞與 DNA 結(jié)合,，使細(xì)胞核發(fā)出紅色熒光。

四,、檢測(cè)方法及優(yōu)勢(shì)

• 流式細(xì)胞術(shù)：可快速定量分析大量細(xì)胞的凋亡情況,。通過(guò)設(shè)置不同對(duì)照樣品，如陰性對(duì)照細(xì)胞（不加染料）,、單染 Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞,、單染 PI 細(xì)胞，調(diào)整電壓和光補(bǔ)償后,，能準(zhǔn)確區(qū)分四類(lèi)細(xì)胞：活細(xì)胞（Annexin V-/PI-）,、早期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI+）和壞死細(xì)胞（Annexin V-/PI+）,。

• 熒光顯微鏡檢測(cè)：適用于觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化和單個(gè)細(xì)胞的凋亡情況,。對(duì)于懸浮細(xì)胞，可按照流式細(xì)胞術(shù)步驟操作后,，將細(xì)胞懸液置于玻片上進(jìn)行觀察,；對(duì)于貼壁細(xì)胞，可在蓋玻片或培養(yǎng)室中培養(yǎng)和誘導(dǎo)凋亡后,，加入工作液孵育,，再進(jìn)行觀察。

Annexin V-AbFluor™ 647 細(xì)胞凋亡/周期檢測(cè)試劑盒具有以下優(yōu)勢(shì)：

• 高靈敏度和特異性：能精確區(qū)分不同階段的凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞,，對(duì)早期凋亡細(xì)胞的檢測(cè)具有很高的靈敏度,。

• 雙通道檢測(cè)：Annexin V-AbFluor™ 647 和 PI 的熒光發(fā)射波長(zhǎng)不同，可實(shí)現(xiàn)雙通道檢測(cè),，提供更全面的細(xì)胞凋亡信息,。

• 良好的兼容性：適配主流流式細(xì)胞儀及熒光顯微鏡平臺(tái)，方便不同實(shí)驗(yàn)室根據(jù)現(xiàn)有設(shè)備選擇使用,。