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亞科因(武漢)生物技術(shù)有...

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果糖-1,6-二磷酸酯酶(FBP)活性檢測:技術(shù)參數(shù)與應用解析

閱讀:118      發(fā)布時間:2025-5-28
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FBP 的生理功能與代謝調(diào)控

果糖-1,6-二磷酸酯酶(Fructose 1,6-bisphosphatase,,F(xiàn)BP)是一種關(guān)鍵的代謝酶,,在糖異生過程和光合作用同化物蔗糖的合成中發(fā)揮重要作用:

  • 糖異生的關(guān)鍵限速酶:FBP 催化 1,6-二磷酸果糖水解生成 6-磷酸果糖和無機磷,是糖異生途徑中的關(guān)鍵限速步驟,。在肝臟和腎臟等糖異生活躍的組織中,,F(xiàn)BP 活性直接決定了糖異生的速率,對維持血糖穩(wěn)定至關(guān)重要,。研究表明,,在禁食狀態(tài)下,肝臟 FBP 活性提高 2.3 倍,確保糖異生過程的高效進行,,維持血糖供應,。

  • 光合作用的蔗糖合成調(diào)控:在植物光合作用中,F(xiàn)BP 參與葉綠體外的蔗糖合成途徑,。它將 1,6-二磷酸果糖轉(zhuǎn)化為 6-磷酸果糖,,為蔗糖合成提供關(guān)鍵中間產(chǎn)物。在光照條件下,,葉片中 FBP 活性顯著升高,,與光合碳代謝和蔗糖合成速率呈顯著正相關(guān)(R2=0.85)。

  • 代謝調(diào)控的樞紐節(jié)點:FBP 活性受到多種因素的精細調(diào)控,,包括底物濃度,、激素信號和酶的磷酸化狀態(tài)。胰高血糖素通過 cAMP 依賴的蛋白激酶 A 使 FBP 發(fā)生磷酸化而失活,,抑制糖異生,;而胰島素則通過激活磷酸酶使 FBP 去磷酸化而激活,促進糖異生,。這種精細調(diào)控確保機體在不同生理狀態(tài)下維持血糖和能量代謝平衡,。

CheKine™ FBP 活性檢測試劑盒(微量法)的檢測原理

亞科因生物的 CheKine™ 果糖-1,6-二磷酸酯酶(FBP)活性檢測試劑盒(微量法)采用酶聯(lián)比色法,通過 NADPH 生成速率反映 FBP 活性:

酶聯(lián)反應體系

  • FBP 的催化反應:FBP 催化 1,6-二磷酸果糖和水生成 6-磷酸果糖和無機磷,。該反應需要 Mn2?作為輔助因子,,在中性偏堿環(huán)境下活性最高。

  • 磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的偶聯(lián)催化:6-磷酸果糖在磷酸葡萄糖異構(gòu)酶作用下轉(zhuǎn)化為 6-磷酸葡萄糖,。此轉(zhuǎn)化反應為可逆過程,,在 Mg2?存在下達到動態(tài)平衡。

  • 6-磷酸葡萄糖脫氫酶的信號放大:6-磷酸葡萄糖在 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下被氧化為 6-磷酸葡萄糖酸,,同時將 NADP?還原為 NADPH,。NADPH 的生成量與 FBP 活性呈正比關(guān)系。

比色反應的定量基礎(chǔ)

  • 340 nm 波長的選擇依據(jù):NADPH 在 340 nm 處具有特征吸收峰,,而 NADP?在該波長處吸收極弱,。通過高精度酶標儀測量 340 nm 處吸光度的變化速率,可實現(xiàn)對 FBP 活性的動態(tài)監(jiān)測,。

  • 線性范圍與靈敏度優(yōu)化:試劑盒的線性檢測范圍為 0.2 - 10 U/mL,,相關(guān)系數(shù) R2≥0.99,檢測限可達 0.05 U/mL,,滿足從動植物組織到細胞培養(yǎng)液等多種樣本的檢測需求,。

反應條件的精細控制

  • pH 與溫度的優(yōu)化組合:反應體系采用 Tris-HCl 緩沖液(pH 7.8 - 8.0),配合 30°C 孵育條件,,確保 FBP 在不同來源樣本中的活性得以穩(wěn)定表達,,同時避免非特異性反應。

  • 抑制劑與激活劑的兼容設(shè)計:反應體系允許加入常見金屬離子(如 Mn2?、Mg2?)和有機化合物,,模擬真實生物體系中的代謝環(huán)境,,確保檢測結(jié)果的生物學相關(guān)性。

應用拓展:FBP 活性檢測的多領(lǐng)域解決方案

基于 CheKine™ FBP 活性檢測試劑盒的高精度與廣泛適用性,,該產(chǎn)品在多個領(lǐng)域展現(xiàn)出應用價值:

  • 糖尿病研究:在糖尿病模型小鼠中,,檢測發(fā)現(xiàn)肝臟 FBP 活性顯著低于正常對照組。進一步研究表明,,F(xiàn)BP 活性與糖異生速率呈顯著正相關(guān)(R2=0.84),,通過激活 FBP 活性,可提高糖異生效率,,改善低血糖癥狀,。

  • 植物生理研究:在研究 CO?濃度升高對植物光合作用的影響中,檢測發(fā)現(xiàn)小麥葉片 FBP 活性在 CO?濃度為 800 ppm 時比對照組(400 ppm)提高 37%,,蔗糖合成速率相應提高 32%,。這表明 FBP 活性是植物響應高 CO?濃度的重要生理指標。

  • 農(nóng)業(yè)科學研究:在篩選耐旱小麥品種時,,發(fā)現(xiàn)耐旱品種在干旱脅迫下 FBP 活性比敏感品種高 2.8 倍,。利用 FBP 活性作為生理指標,可加速耐旱作物品種的選育進程,。

  • 醫(yī)學研究:在研究肝臟疾病時,,檢測發(fā)現(xiàn)肝硬化患者肝臟組織中 FBP 活性顯著降低,與肝細胞損傷程度呈顯著負相關(guān)(R2=0.89),。FBP 活性檢測可作為肝臟功能評估的潛在生物標志物,。



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