2× PFU PCR Master Mix(含染料)

2×Pfu PCR Master Mix（含染料）

目錄號：71111

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 2 年,。經(jīng)常使用,，可置于 4 °C 保存,，有效期 3 個月,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品包含Pfu DNA聚合酶,、dNTPs、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,，濃度為2×。 保真度是Taq酶的54倍,，用于高保真PCR反應(yīng),、復(fù)雜模板如GC含量高(>60%)， 有二級結(jié)構(gòu)等的擴增和大規(guī)模的基因檢測,。

PCR產(chǎn)物為平末端,，純化后可直接用于Blunt載體克?。–at#V116,、 V117）。

本產(chǎn)品含紅色示蹤染料,，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳,；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切,、連接、測序等后續(xù)操作,。

適用范圍：

高保真DNA擴增:如表達基因的克隆,、基因的定點突變,、細胞內(nèi)基因點突變的分析(SNP)和末端補平,。

基因檢測：適合大規(guī)?；驒z測,，半定量PCR實驗和微量DNA的檢測,。

產(chǎn)品特點

具有快速簡便、靈敏度高,、特異性強,、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,，可最大限度的減少人為誤差,。

2   × Pfu PCR Master Mix 使用說明：

一,、配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)

參考模板用量（50 μl 反應(yīng)體系）：

質(zhì)粒：0.1-10 ng；細菌基因組：10-100 ng,；人類基因組：50-150 ng,；cDNA：1-5 μl 。

二,、建議 PCR 循環(huán)條件：

注意：如果擴增片段≤4 kb,，建議延伸速度為 1kb / min；片段＞4 kb,，建議 0.5kb / min,。

注意事項：

a. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性,，所以Pfu酶擴增時延伸速度比Taq酶低，應(yīng)根據(jù)擴增產(chǎn)物的長度設(shè)置相應(yīng)的延伸時間,，如果擴增片段小于4 kb,，建議Pfu酶的延伸速度為1kb/ min；如果擴增片段大于4 kb,，建議延伸速度為0.5kb / min,。同時Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以應(yīng)先加dNTP后,，再加Pfu酶到反應(yīng)體系中,，并立即進行PCR反應(yīng)。

b. 用Pfu酶擴增時,，引物的純度要求較高,，引物長度大于18個堿基，Tm在55－80℃ 之間,，引物濃度在0.1-0.5 μM之間,，比Taq酶略高。

c. Pfu酶的熱穩(wěn)定性比Taq酶好,，對于GC含量很高的模板,，變性溫度可以提高到98℃，對Pfu酶的活性無影響,。

三,、結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測,。

2×Pfu PCR Master Mix（含染料）