諾博萊德 Caspase-2活性檢測試劑盒Caspase-2 Activity Assay Kit

Caspase-2活性檢測試劑盒 細胞凋亡檢測方法

產(chǎn)品貨號：BC1608

產(chǎn)品名稱：Caspase-2活性檢測試劑盒Caspase-2 Activity Assay Kit

英文名稱：Caspase-2 Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T/20T

產(chǎn)品簡介：

檢測方法：比色法 Colorimetric

儲存條件：Store at -20℃,，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderBC1608 Caspase-2活性檢測試劑盒Caspase-2 Activity Assay Kit是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員,。Caspase-2也稱Ich-1或 Nedd-2，在細胞凋亡的信號轉導過程中被激活,。Caspase-2的 mRNA 具有兩種不同剪切變體,，其全長mRNA 翻譯的蛋白可促進凋亡,而短蛋白產(chǎn)物則可抑制凋亡。Caspase2可以被Caspase-1,、3 和 granzyme B 激活,。

本試劑盒測定原理基于Caspase-2特異水解其多肽底物 N-acety1-Val-Asp-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-VDVAD-pNA),釋放出游離的硝基苯胺 NA，后者呈黃色在405nm 具有最大吸收峰,，用可見光分光光度比色方法測定,。其吸光度值對應于 Caspase-2的水解活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀,、100L 玻璃比色皿/96 孔板,、臺式離心機,、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器,、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻)

1,、培養(yǎng)細胞:先收集細胞到離心管，離心后棄上清;按照細胞數(shù)量(約106個)加100L試劑二(若裂解不充1.分可提高至 150-200mL),，震蕩重懸沉淀,，置冰上靜置15min,15000g4℃離心10-15min,取上清置冰上待測。

2,、組織:按照組織質量(g):試劑二體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,，加入ImL 試劑二)，冰浴研磨或充分剪碎,，置冰上靜置15min,，4℃，15000g離心10-15min,，取上清置冰上待測,。

二、測定步驟

1,、可見分光光度計/酶標儀預熱30min 以上,，調節(jié)波長至405nm，分光光度計蒸餾水調零,。

2,、標準溶液的稀釋:將5mmolLpNA 標準品用標準品稀釋液稀釋至 200、100,、50,、25,、12.5、0umol的標準溶液備用,。

注意事項:

1,、由于試劑二中含有還原劑(DTT),，建議將樣本用水稀釋2倍后，用Bradford 法測定蛋白濃度,，以降低 DTT對蛋白濃度測定的干擾,，不建議使用 BCA法測定蛋白濃度，

2,、Caspase 活性測定值低最常見的原因是細胞未發(fā)生凋亡或細胞量太少,，其次是觀測時間不恰當,。誘導凋亡時，2,、并非劑量越大時間越長 Caspase 活性就越高,。建議設置不同劑量和時間點如 0、2,、4,、8、16,、24小時,，以檢測最佳的觀察點。

3,、所測樣本的值高于標準曲線上xian是,，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。

4,、蓋緊 96 孔板蓋子并用封口膜密封,。37℃孵育，肉眼可見顏色變黃時的 OD405值約為0.2,，此時即可測定,。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時,，孵育時間過長將導致反應失去線性關系,。

Caspase-2活性檢測試劑盒 細胞凋亡檢測方法

產(chǎn)品訂購信息

BC1608 Caspase-2活性檢測試劑盒Caspase-2 Activity Assay Kit  50T/100T/20T