諾博萊德 鏈霉蛋bai酶E PronaseE

鏈霉蛋bai酶E PronaseE   輔助試劑

產(chǎn)品貨號：P6148

產(chǎn)品名稱：鏈霉蛋bai酶E PronaseE

英文名稱：PronaseE

產(chǎn)品規(guī)格：250mg

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：2-8℃,，有效期1年

外觀(性狀)：白色至淺黃色粉末

酶活/效價：效價以實際標簽為準

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderP6148 鏈霉蛋bai酶E PronaseE是一種非特異性蛋白水解酶。常用于提取DNA和RAN時蛋白消化,；研究蛋白結(jié)構(gòu),；從純化的糖蛋白中獲得糖肽等。

使用說明（以下操作內(nèi)容來自公開文獻,，僅供參考）：

消化蛋白

1. 儲存液制備：溶解于去離子水,，配制成5-20mg/mL的PronaseE儲存液，若用于DNA或RNA分離步驟,，建議將溶液56℃加熱處理15min,，之后37℃孵育1h，此步驟能促使酶發(fā)生自消化,，以去除DNase和RNase污染,。之后將儲存液分成單次用量,，-20℃凍存。

2. DNA分離：直接加入DNA制備體系（含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用）,，典型Pronase E 工作濃度范圍250-500μg/mL,，于37℃孵育1-4h?！咀⒁猓航ㄗh工作濃度范圍在250-2000μg/mL,，依照具體情況而定】

3.  蛋白水解：溶解約0.2μM蛋白到0.2mL50mM碳酸氫銨緩沖液，pH8.0（或磷酸鹽緩沖液,，pH7.0）,，之后按照1%（w/w）加入PronaseE，于37℃孵育24h,。根據(jù)情況,，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h,。

分離小鼠原代造血干細胞

1. 雄性或雌性小鼠被麻醉,，并打開腹腔。

2. 肝臟經(jīng)門靜脈灌注Hanks緩沖鹽溶液（HBSS）,，然后灌注PronaseE和膠原酶,。

3. 用無菌鑷子輕輕取出肝臟，轉(zhuǎn)移到無菌培養(yǎng)皿中,。將肝包膜分開,，輕輕搖晃肝臟以釋放細胞。

4. 將細胞懸浮于含有PronaseE,、膠原酶和DNase的溶液中,，然后在37℃下消化20min。肝細胞經(jīng)50g離心3min,，兩輪分離,。

5. 上清在450g下離心獲得造血干細胞8min，然后用18%尼基丹（Nycodenz）溶液懸浮沉淀,，制備12%Nycodenz,、8.2%Nycodenz 和Gey's 平y(tǒng)an鹽溶液（GBSS）密度梯度離心。

6. 最終,，從8.2%的Nycodenz層中純化細胞,，獲得造血干細胞。

注意事項：

1,、一旦配成溶液,，請分裝保存，避免反復(fù)凍融造成的產(chǎn)品失效。

2,、 本產(chǎn)品僅供科研使用,。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,，食品及化妝品等用途,。請勿存放于普通住宅區(qū)。

3,、為了您的安全和健康,，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

鏈霉蛋bai酶E PronaseE   輔助試劑

產(chǎn)品訂購信息

P6148 鏈霉蛋bai酶E PronaseE  250mg