諾博萊德  通用基因組DNA提qu試劑盒

通用基因組DNA提qu試劑盒  質(zhì)粒提取

產(chǎn)品貨號(hào)：D0988

產(chǎn)品名稱：通用基因組DNA提qu試劑盒 Universal Genomic DNA Extraction Kit

英文名稱：Universal Genomic DNA Extraction Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：酶附件-20℃,，其它試劑RT,，復(fù)檢期1年

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderD0988  通用基因組DNA提qu試劑盒本試劑盒為通用型，適合于從土壤，糞便,，昆蟲,，以及其他樣本中提取基因組DNA。對(duì)細(xì)菌,，真菌,，昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果，最大限度的保留了生物DNA的多態(tài)性,。

使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大,、完整性好，可直接用于各種常規(guī)操作,，包括酶切,、PCR 、文庫(kù)構(gòu)建,、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn),。

操作步驟（僅供參考）：

* 使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽（每瓶需單獨(dú)加入 45mL 無(wú)水乙醇）,。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心,。

1、樣品處理：

1）土壤：稱取0.1-0.3 g (根據(jù)干濕)土壤,，放入研缽中,，倒入適量的液氮，立即研磨,，重復(fù)3 次,，使土壤顆粒研成粉末，加500 μL溶液A,，振蕩至che底懸浮,。

2）糞便：稱取0.1-0.3 g (根據(jù)干濕) 糞便，加500 μL溶液A,，振蕩至che底懸浮,。

3）昆蟲：稱取0.1-0.3 g 昆蟲，倒入適量的液氮,，立即研磨,，重復(fù)3次，使昆蟲研成粉末,，加500 μL溶液A,，振蕩至che底懸浮。

4）未知樣品,，如為細(xì)未狀,，可直接稱取0.1-0.3 g(根據(jù)干濕)加500 μL溶液A,，如為塊狀，可0.1-0.3 g 用液氮研磨成粉未,，再加500 μL溶液A,，振蕩至che底懸浮。

2,、向懸浮液中加入2 μL RNase A,，55℃放置10 min。

3,、加入20 μL的蛋bai酶K,，充分混勻，55℃水浴消化,，30 min,。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，12000轉(zhuǎn)離心10 min,。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,，可再次離心,。

4、加入500 μL溶液B,，充分混勻,。如出現(xiàn)白色沉淀，于55℃放置5 min,，沉淀即會(huì)消失,，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,，說(shuō)明樣品消化不che底,，可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子,，請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間,。

5、加入500 μL無(wú)水乙醇,，充分混勻,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取,，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,，放置2 min (分兩次加入，每次700 μL),。

6,、12000 rpm 離心2 min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。

7,、向吸附柱中加入600 μL漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000 rpm離心1 min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。

8,、向吸附柱中加入600 μL漂洗液,，12000 rpm離心1 min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中

9,、12000 rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等,。

10,、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200 μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置5 min,，12000 rpm離心2 min。

11,、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,，室溫放置2 min，12000 rpm離心2 min,，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA,。

注意事項(xiàng):

1、由于樣品不同,，最終提取的DNA含量和純度也有所不同,，一般來(lái)說(shuō)，如果所提取DNA用電泳的方法檢測(cè)不到,，PCR會(huì)有結(jié)果,，樣品盡可能的新鮮。否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降,。

2,、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用,，不影響提取效果,。

3,、如果樣品消化不che底，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況,，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間,。

4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50 μL,，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率,；洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率,；DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解,。

5,、DNA 濃度及純度檢測(cè)（濃度較高時(shí)）：得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān),?；厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,， OD260值為 1 相當(dāng)于大約 50 μg/ mL 雙鏈 DNA,、40 μg/ mL 單鏈 DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水,，比值會(huì)偏低,，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低,。

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