NobleRyderD9948  酵母質(zhì)粒小量提取試劑盒 Yeast Plasmid Extraction Kit

酵母質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：D9948

產(chǎn)品名稱：酵母質(zhì)粒小量提取試劑盒 Yeast Plasmid Extraction Kit

英文名稱：Yeast Plasmid Extraction Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：酶附件-20℃,，其它試劑RT,，復(fù)檢期1年

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

本試劑盒采用酶法破碎酵母細胞壁和堿裂解法裂解酵母細胞來提取酵母質(zhì)粒DNA。所采用的酵母破壁酶能有效地破壞酵母細胞壁,，提高酵母質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量,。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細胞中其他有機化合物,。使用本試劑盒提取的酵母質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)實驗，包括酶切,、PCR,、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗,。本試劑盒無需使用酚,、氯仿等有毒試劑，操作安全,。

注意事項：

1,、溶液YP1在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA全部加入)，混勻,，置于2-8℃保存,。

2、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇),。

3,、使用前請先檢查溶液YP2和溶液YP3是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象,，可在37℃水浴中加熱幾分鐘,，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。

4,、溶液YP2,、溶液YP3和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子，如非指明,，所有離心步驟均為使用臺式離心機室溫下進行離心,。

5、質(zhì)粒得率與酵母菌株,、質(zhì)?？截悢?shù),、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)。通常酵母質(zhì)?？截悢?shù)都很低,，因此質(zhì)粒得率一般為每5ml菌液提取1ug左右。

6,、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過小會影響回收效率,；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率,。

操作步驟（僅供參考）：

1. 取 1-5mL 酵母培養(yǎng)物（不超過5×107cells）,， 12000rpm 離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）,。

2. 酵母細胞壁的破除：

A,、酶法：向酵母菌體中加入470μL山li醇Buffer，充分懸浮菌體,，加入25μL酵母破壁酶和5μL巰基還原劑,，充分混勻，30℃處理1-2h,，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,。12000rpm離心1min，棄上清,，收集沉淀,。向沉淀中加入250μL YP1（請先檢查是否已加入RNaseA），充分懸浮沉淀,。注意：如果菌塊未che底混勻,，會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。

B,、玻璃珠法：向酵母菌體中加入250μL YP1（請先檢查是否已加入RNaseA）,，充分懸浮沉淀。加入150-200μL酸洗玻璃珠（自備）,，漩渦振蕩10min,。簡短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失,，請用YP 1補足至250μL）于另一干凈離心管中,。

3. 向離心管中加入250μL YP2，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解,。注意：混勻一定要溫和,，以免污染酵母基因組DNA,，此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠，作用時間不要超過5 min,，以免質(zhì)粒受到破壞,。

4. 向離心管中加入350μL YP3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,，充分混勻,，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心20 min,，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,，盡量不要吸出沉淀。注意：YP3 加入后應(yīng)立即混合,，避免產(chǎn)生局部沉淀,。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清,。

5. 取上一步上清,，加入0.4倍體積無水乙醇，充分混勻,。（體積過多可分兩次混合,，然后上柱）

6. 將上一步所得上清液加入吸附柱中，室溫放置2min,，12000rpm離心1min,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中,。

7. 向吸附柱中加入600μL漂洗液Ⅰ(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中,。

8. 向吸附柱中加入 600μL 漂洗液ⅠⅠ(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。

9. 重復(fù)操作步驟8,。

10. 12000rpm 離心 2min,，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切,、PCR等。

11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置2min,，12000rpm離心1min。

12. (可選)為了增加質(zhì)粒的回收效率,，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,，室溫放置2min，12000rpm 離心1min,。

注意事項：

1,、使用前請先檢查YP2和YP3是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象,，可在37℃水浴中加熱幾分鐘,，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。

2,、洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μL，體積過小影響回收效率,；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0會降低洗脫效率,；DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,，以防DNA降解。

3,、質(zhì)粒得率與酵母jun株,、質(zhì)粒拷貝數(shù),、培養(yǎng)條件等因素有關(guān),。通常酵母質(zhì)粒拷貝數(shù)都很低,，一般通過電泳或分光光度計法都很難檢測到,，可通過PCR或轉(zhuǎn)化大腸桿菌來檢測。

4,、DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降?DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰， OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/mL雙鏈DNA,、40 μg/mL 單鏈 DNA,。OD260/OD280比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水,，比值會偏低,，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低,。

酵母質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息

D9948  酵母質(zhì)粒小量提取試劑盒 Yeast Plasmid Extraction Kit  50T

D9948  酵母質(zhì)粒小量提取試劑盒 Yeast Plasmid Extraction Kit   100T