NobleRyderD9908  革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit

革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取

產(chǎn)品貨號(hào)：D9908

產(chǎn)品名稱：革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit

英文名稱：Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

儲(chǔ)存條件：酶附件-20℃,，其它試劑RT,，復(fù)檢期1年

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderD9908  革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit產(chǎn)品內(nèi)容

注意：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽,。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入）,，混勻,，置于 2-8℃保存。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心,。

操作步驟（僅供參考）：  

1. 取1-5 mL 細(xì)菌培養(yǎng)物,，12000 rpm離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時(shí)可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中）,。  

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入200 μL溶液Ⅰ(請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA）,，使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀,。再向其中加入50μL溶jun酶，混勻,，37℃水浴30 min以上（根據(jù)菌液量可適當(dāng)加長水浴時(shí)間）,。注意：如果菌塊未che底混勻，會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低,。如不能確定為何種菌,，請(qǐng)按陽性菌處理。  

3. 向離心管中加入250 μL溶液Ⅱ,，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解,。注意：混勻一定要溫和，以免污染基因組DNA,，此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠,，作用時(shí)間不要超過5 min，以免質(zhì)粒受到破壞,。  

4. 向離心管中加入350 μL溶液Ⅲ,，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次，充分混勻,，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀,，12000 rpm離心10 min 。注意：溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混勻,，避免產(chǎn)生局部沉淀,。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清,。

5. 取上一步上清,，加入0.4倍體積無水乙醇，充分混勻,。（體積過多可分兩次混合,，然后上柱）。

6. 將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中）,，室溫放置2 min,，12000 rpm 離心1 min，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中( 如果一次加不完,，可分兩次吸附) 。  

7. 向吸附柱中加入600μL漂洗液Ⅰ(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。

8. 向吸附柱中加入 700μL 漂洗液Ⅱ(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm 離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。

9. 向吸附柱中加入500μL漂洗液Ⅱ,，12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。

10. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等,。

11. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置2min,，12000rpm離心1min。

12. (可選)為了增加質(zhì)粒的回收效率,，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,，室溫放置 2min，12000rpm 離心1min,。

注意事項(xiàng)：  

1. 使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,，如有混濁現(xiàn)象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,，待溶液恢復(fù)澄清后再使用,。  

2. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μL，體積過小影響回收效率,；洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右( 可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍) ，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率,。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,，以防DNA降解。  

3. 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼笥?0 kb的大質(zhì)粒,，應(yīng)加大菌體使用量，使用5-10 mL過夜培養(yǎng)物,，同時(shí)按照比例增加溶液Ⅰ,、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)?shù)难娱L時(shí)間,，以增加提取效率,。  

4. DNA 濃度及純度檢測：得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時(shí)間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。得到的 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度,。DNA 應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ mL雙鏈DNA、40 μg/ mL單鏈DNA,。OD260/OD280比值應(yīng)為 1.7-1.9,，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水,，比值會(huì)偏低,，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低,。

革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒 質(zhì)粒提取

產(chǎn)品訂購信息

D9908  革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit  50T
D1118  革蘭氏陽性菌質(zhì)粒小量提取試劑盒 Gram-positive Bacterium Plasmid Extraction Mini Kit  100T