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上海語純生物科技有限公司
初級會員·1年BH0231sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型人神經(jīng)母細胞瘤細胞
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- BH0231 產(chǎn)品型號
- 語純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：40更新時間：2025-04-29 12:50:23
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BH0231 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號：BH0231
產(chǎn)品規(guī)格：1×10^6
本產(chǎn)品僅供科學研究或進一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型人神經(jīng)母細胞瘤細胞(STR鑒定）
細胞介紹
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。 該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大于1X106細胞/cm2,。
將載有HSPB1-S135F為突變型，野生型基因第404位堿基C替換為堿基T的pRK7質(zhì)粒，且HSPB1的N-端連有FLag標簽,，做為基因模板，來構(gòu)建慢病毒過表達載體,，再包裝成慢病毒,，將轉(zhuǎn)染好的病毒對SH-SY5Y細胞進行轉(zhuǎn)染，最終篩選出能穩(wěn)定表達外源基因的細胞系,。
細胞特性
1） 來源：腦神經(jīng)母細胞瘤,，轉(zhuǎn)移部位骨髓
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，半貼壁（貼壁和懸浮同時存在）生長
3） 含量：>1x106細胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用,。
運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。
3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的情況,，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用專用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 43%
Ham's F-12 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 43%
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10 %
MEM NEAA非必需氨基酸 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1%
GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%
P/S青霉素-鏈霉素 1%
該細胞為貼壁和懸浮同時存在，換液和傳代時需要分別回收貼壁和懸浮細胞,，否則細胞會越來越少,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二． 細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，專用培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
該細胞輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細胞,，傳代可以參考以下方法：
1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中,。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中,。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 將收集到的懸浮細胞,、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min,，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例,；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù),，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱,、代數(shù),、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型人神經(jīng)母細胞瘤細胞(STR鑒定）
