諾博萊德 RIPA裂解液(強) 樣本裂解采集

產(chǎn)品簡介：
   
   多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白,，例如 Triton、SDS,、NP-40 等,。RIPA 裂解液（強） (Enhanced RIPA Lysis Buffer )，是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解,，并獲得總蛋白的裂解液,，其裂解強度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中),。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 Western,，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等,。Enhanced RIPA Lysis Buffer 主要由 Tris ,、NP-40、sodium deoxycholate 等組成,，并含有多種蛋白酶抑制劑成分,，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用,。 
 
產(chǎn)品組成：

操作步驟(僅供參考)：
 
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1,、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF,，使 PMSF 終濃度為 1mM,。
2、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,，用 PBS,、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次，低速離心,，棄上清,，留取沉淀。
3、 按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,，加入 RIPA Lysis Buffer ,。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。置于冰上或 4℃裂解 15～30min,，通常裂解液作用于細(xì)胞 1～3 秒內(nèi)，細(xì)胞就會被裂解,。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl,。
4,、 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機,，室溫下離心亦可),，取上清。5,、 進行后續(xù)的 SDS-PAGE,、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
1,、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF,，使 PMSF 終濃度為 1mM,。
2、 低速離心懸浮細(xì)胞,，棄上清,，收集沉淀。
3,、 用手指輕彈細(xì)胞,，使其松散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,，加入 Enhanced RIPA Lysis Buffer,。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl,。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。
4,、 10000～12000g,，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清,。5,、 進行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。
(三)組織樣本
1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻,，,，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM,。
2,、把組zhi剪切成細(xì)小的碎片，越小越好,。取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織,，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi),，以減少蛋白的降解,。
3按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃
裂解 15-30min,。
4,、步驟 3、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer,。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi),，以減少蛋白的降解,。
5、 10000～12000g,，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機,，室溫下離心亦可)，取上清,。6,、 進行后續(xù)的 PAGE、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作,。
 
諾博萊德 RIPA裂解液(強) 樣本裂解采集

注意事項：
 
1、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,，如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以丌用清洗,。
2、 如果裂解丌充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,，如果需要高濃度的蛋白樣品,，可以適當(dāng)減
少裂解液的用量。
3,、 如果細(xì)胞量較多,，必需分裝成 50～100 萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解,。大團的細(xì)胞較難
裂解充分,，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對比較容易裂解充分,。
4,、 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強烈 Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實驗,。
5、 溶解 NobleRyder RIPA Lysis Buffer 時,，應(yīng)盡量縮短溶解時間,，避免有效成分失效。
6,、 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物,。在丌檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如 NF-KB、p53 等時,，通常丌必進行超聲處理,，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
7,、 細(xì)胞裂解的操作步驟,，應(yīng)置于冰上或 4℃進行,。
 
 
有效期： 12 個月有效。