K7M2-WT+LUC 小鼠骨肉瘤成骨細胞

細胞鑒定：種屬鑒定已通過

細胞來源：國家資源庫
細胞背景：C Khanna1998年建立，是合適的腫瘤模型。在 BALB/c 小鼠中形成腫瘤，并在超過 90% 的接種小鼠中自發(fā)轉移到肺部。CD31 + Ref+,。分泌型磷蛋白 1（骨橋蛋白）因子 VIII；整合素結合唾液蛋白 (BSP); 比利亞安; 裝飾素,；小人 2 (ezrin) ,。骨唾液蛋白、biglyan,、decorrin 和骨橋蛋白的表達提示骨譜系細胞,。

細胞特性：
1） 來源：BALB/c 器官: 骨 疾病: 骨肉瘤 來源轉移灶: 肺 細胞類型: 成骨細胞;

2） 形態(tài)：成骨細胞  貼壁生長

 用途：僅供科研使用
培養(yǎng)條件
：1） 準備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清,，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
注意事項:該細胞為穩(wěn)定轉染的細胞,，隨細胞傳代次數(shù)的增加,，其熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選,。建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選,。初次進行細胞篩選時,，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的專用培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少,，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的專用培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml,。若篩選過程中,，漂浮細胞大于60%，則停止篩選,，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細胞密度約80%,，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選,。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選,，用不含藥專用培養(yǎng)基正常培養(yǎng),。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

K7M2-WT+LUC 小鼠骨肉瘤成骨細胞