產(chǎn)品概述

【產(chǎn)品規(guī)格與保存】

【產(chǎn)品穩(wěn)定性】

1,、所有的產(chǎn)品都需要避光保存,；

2、所有產(chǎn)品一旦超過標(biāo)簽注釋的有效期,，必須放棄使用,；

3、配制成專用培養(yǎng)基后,，避光保存在2-8℃可存放3-4周,；

4、為了更好的使用效果,，請勿對試劑進(jìn)行反復(fù)凍融,。

【產(chǎn)品主要成份】

間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的主要組成成分：氨基酸，維生素,、無機(jī)鹽,、白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白,、胰島素,、微量元素等。

【產(chǎn)品使用方法】

1,、人間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基準(zhǔn)備

將間充質(zhì)干細(xì)胞無血清生長添加劑(MSCGs)在2-8℃過夜融化,，按1:100比例加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即成為間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基,。

溫馨提示：間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基2-8℃避光條件下,，可保存30天。若小量,、多次使用,，建議您將間充質(zhì)干細(xì)胞無血清生長添加劑(MSCGs)分裝后，保存于-20℃冰箱,，可避免培養(yǎng)基不必要的浪費,。

2、人間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇（以T-75瓶為例）

①從冰箱中取出專用培養(yǎng)基,，在生物安全柜或超凈臺中吸取適量（如T-75瓶：10-15mL)專用培養(yǎng)基沿上表面加入間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,，切勿沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面，即：細(xì)胞生長面,。然后慢慢將細(xì)胞培養(yǎng)瓶平放,，在37℃、恒溫CO2培養(yǎng)箱中放置5-10分鐘后使用,。

溫馨提示：請嚴(yán)格按照此步驟操作,，否則可能會出現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞生長空白區(qū)域，即所謂的“生長空洞"。多數(shù)用戶使用的不是專用的預(yù)包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，而是普通的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿,，其表面環(huán)境并不利于無血清培養(yǎng)環(huán)境下的間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁。37℃放置5-10分鐘,，可讓培養(yǎng)基中的促貼壁物質(zhì)更好地與細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部結(jié)合,，使得間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁能力增強(qiáng)，降低“生長空洞"出現(xiàn)的概率,。

②從液氮中取出凍存的間充質(zhì)干細(xì)胞,，迅速將凍存管放入37℃水浴中，快速融解,。

溫馨提示：盡可能避免水沒過管帽,，以減少污染的風(fēng)險；要快速完成細(xì)胞復(fù)蘇過程（盡量控制在1分鐘內(nèi)）,，融化過程時間過長,，會造成復(fù)蘇后細(xì)胞活性較差。

③用70%-75%酒精消毒凍存管外壁,，在生物安全柜或超凈臺中打開凍存管,，用吸管/移液器將細(xì)胞凍存懸液緩慢移入裝有5-10mL細(xì)胞專用培養(yǎng)基的15mL離心管中（在這一過程請盡可能避免產(chǎn)生氣泡）。

溫馨提示：為了減少細(xì)胞損失,，往細(xì)胞凍存管中加入1mL專用培養(yǎng)基,，稍微吹打，用吸管/移液器將這1mL的細(xì)胞懸液吸入離心管中,，再用吸管/移液器將離心管中的細(xì)胞輕輕吹打混勻,。

④1200rpm離心5min，棄上清,，加入2mL專用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，臺盼藍(lán)染色計數(shù)，按密度2×10⁴cells/cm²將細(xì)胞接種至步驟①中孵育完的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,，添加細(xì)胞時,，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立，細(xì)胞懸液直接加到底部,，切忌沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面,。

⑤輕輕搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布,，混勻后,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。

⑥24h后,，更換新鮮的專用培養(yǎng)基（溫育至37℃）。

3,、人間充質(zhì)干細(xì)胞傳代（以T-75瓶為例）

①在顯微鏡下觀察細(xì)胞,，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%,，即可傳代,。

溫馨提示：細(xì)胞融合度請勿超過90%。很多傳代后的細(xì)胞大比例死亡,，是由于傳代前細(xì)胞生長過密（融合度過高）,，導(dǎo)致細(xì)胞消化異常（細(xì)胞整片或成片脫落），加之隨后的不當(dāng)操作（如用移液器反復(fù)吹打成片細(xì)胞使其成為單個細(xì)胞）,，此機(jī)械損失過程會嚴(yán)重?fù)p害細(xì)胞膜,，引發(fā)大比例的細(xì)胞死亡；間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)凍存后再次使用時,，尤為明顯,。

②預(yù)處理細(xì)胞培養(yǎng)瓶，處理方法同細(xì)胞復(fù)蘇中的步驟①,。

③在生物安全柜或超凈臺中,，棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，加入5-10mL PBS清洗細(xì)胞后棄去,，再加入2mL 0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,。

④在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓時，立即加入5mL胰酶抑制劑終止消化,。

⑤用移液器輕輕吹打瓶壁上還未專用脫離的細(xì)胞,，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞專用分散,。

⑥將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中,，1200rpm離心5min。棄上清,，加入2mL細(xì)胞專用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，臺盼藍(lán)染色計數(shù)，按細(xì)胞密度2×10⁴cells/cm²,，將細(xì)胞接種至細(xì)胞傳代②步驟中孵育完的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,，添加細(xì)胞時，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立,，細(xì)胞懸液直接加到底部,，切忌沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面。

⑦輕輕搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿,，使細(xì)胞均勻分布,，混勻后,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。

4、人間充質(zhì)干細(xì)胞凍存

①用0.05%胰酶-EDTA消化待凍存的細(xì)胞,，加入胰酶抑制劑終止消化并離心,，重懸后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

②1200rpm離心5min,，棄上清,。

③根據(jù)細(xì)胞計數(shù)情況，緩慢加入適量冷的無血清凍存液（無血清凍存液可即拿即用或置于冰袋備用）,，調(diào)整細(xì)胞密度在1×10⁶cells/mL左右,。

④輕輕地重懸細(xì)胞，將重懸均勻的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管中（需提前做好標(biāo)記）,，旋緊凍存管蓋,。

⑤迅速將凍存管放入程序降溫盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃冰箱,。

⑥過夜放置后,，將細(xì)胞從-80℃冰箱轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。