涉及濕熱滅菌生物指示劑試驗指將一定量的已知D值微生物耐熱孢子接種到待滅菌的產(chǎn)品中，在設(shè)定的滅菌程序條件下限滅菌，以驗證設(shè)定的滅菌工藝程序是否確實賦予產(chǎn)品所設(shè)定的F0值,，由此進行的實驗和評價過程也稱為挑戰(zhàn)性試驗,。
濕熱滅菌生物指示劑操作步驟如下：
濕熱滅菌生物指示劑驗證方案制定的重點在產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性,、產(chǎn)品的污染水平與污染菌的耐熱數(shù)據(jù),。
（1）產(chǎn)品分析（接種模擬污染水平≥生產(chǎn)污染水平）；
（2）確定菌種孢子,，選擇強于產(chǎn)品常見污染菌的熱耐受菌種孢子（菌種孢子含量的準確性,，質(zhì)量資料具備可追溯性，在有效期內(nèi)）,；
（3）選取非致病菌,，且具有良好的重現(xiàn)性能；
（4）應在接種同時留置多支陽性對照品,，試驗過程同步采樣培養(yǎng),。
濕熱滅菌生物指示劑充分采用熱分布及熱穿透的工作數(shù)據(jù)
裝載和樣品按照熱穿透布置不變。特別關(guān)注滅菌釜的zui冷點,、次冷點以及同步點樣品編號,。
設(shè)置試驗溫度滅菌限（也稱低限滅菌）
既低于設(shè)計值,，比F0 低3 %——5%進行滅菌。由此而設(shè)計滅菌程序時間,，如滅菌值F0 產(chǎn)品計算下限為8.5,，設(shè)計為8.3限。
濕熱滅菌生物指示劑按擬訂下限滅菌程序結(jié)束
（1）QC現(xiàn)場采樣,，試驗編號數(shù)據(jù)和對照品編號數(shù)據(jù)同步收集,；
（2）樣品按照確定菌種孢子培養(yǎng)要求（一般在特定溫度和有好氧與厭氧條件區(qū)分）；
（3）實驗樣品和陽性品同條件分別培養(yǎng)觀測,。如陽性品正常培養(yǎng)失敗,，既可判試驗無效而失敗。因盾之不存,，矛的鋒利無從談起,。
濕熱滅菌生物指示劑檢測試驗的重現(xiàn)性
每一品種規(guī)格的滅菌程序至少應進行3次以上的試驗，試驗的數(shù)據(jù)必須穩(wěn)定一致,，重現(xiàn)性良好,。否則，查找原因,，重新開始,。
生物指示劑挑戰(zhàn)性試驗是一項典型的滅菌安全性評價驗證，需要工藝人員試驗技師和QC方面密切的配合和的設(shè)計,。達到2.6.4與2.6.5可接受的標準后，可以證實試驗成功,，它代表工藝設(shè)計的滅菌程序與參數(shù)是合理的,，也賦予了產(chǎn)品足夠的安全性。另一方面,，也證實前期設(shè)備的選擇是符合生產(chǎn)需要的硬件,。
操作擬訂的SOP、SMP把生產(chǎn)技術(shù)操作過程置于可控范圍,，至此本項驗證工作可以告結(jié)束,，轉(zhuǎn)入下一項定期再驗證流程。這樣,，為將來產(chǎn)品滅菌質(zhì)量保證鎖上了“第二把鎖” ,。