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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
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一,、產(chǎn)品概述
Roche LightCycler 480 是一款適用于中高通量實(shí)驗(yàn)室的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qPCR）平臺(tái)，支持 96 孔和 384 孔板兩種格式,。其模塊化設(shè)計(jì)結(jié)合高精度溫控與多通道熒光檢測(cè),，可靈活配置實(shí)驗(yàn)方案，并兼容多種熒光染料和探針,。LightCycler 480 廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析,、病原體檢測(cè)、表觀遺傳學(xué)研究,、SNP 分型及拷貝數(shù)變異檢測(cè)等領(lǐng)域,。
二、系統(tǒng)架構(gòu)與硬件組成
機(jī)箱與尺寸
外殼采用金屬與抗腐蝕涂層,，尺寸約 50 cm×58 cm×54 cm,，適合實(shí)驗(yàn)臺(tái)或安裝架放置；
凈重約 30 kg,，設(shè)計(jì)有可拆卸頂蓋,，便于維護(hù)與清潔。
溫控模塊
半導(dǎo)體制冷加熱（Peltier）技術(shù),，支持 4 °C–99 °C 溫度范圍,；
溫度控制精度 ±0.1 °C，均一性 ≤ 0.2 °C；
升溫速率最高可達(dá) 4 °C/s,，降溫速率約 3 °C/s,。
光學(xué)檢測(cè)單元
激發(fā)源：多色 LED，包括藍(lán)（470 nm）,、綠（530 nm）,、黃（590 nm）和紅（630 nm）光區(qū)；
檢測(cè)器：光電二極管陣列（PMT）,，信噪比可達(dá) 1:1000；
通道切換：自動(dòng)濾光片切換,，延遲 < 8 ms,；
支持 FAM、HEX/VIC,、ROX/TAMRA,、Cy5、Cy3 等多種染料組合,。
板式適配
標(biāo)配 96 孔板架,；可選配 384 孔板適配器，單次檢測(cè)量提升 4 倍,；
兼容條管,、單管及定制微流控芯片。
控制與接口
高分辨率觸摸屏面板,，實(shí)時(shí)顯示擴(kuò)增曲線與熔解曲線,；
PC 端軟件通過(guò) USB 2.0、LAN 或 RS-232 接口連接,；
支持遠(yuǎn)程監(jiān)控與實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIMS）對(duì)接,。
三、關(guān)鍵性能指標(biāo)
| 性能指標(biāo) | 技術(shù)參數(shù) |
|---|---|
| 溫度控制精度 | ±0.1 °C |
| 溫度均一性 | ≤ 0.2 °C |
| 最大升溫速率 | 4 °C/s |
| 最大降溫速率 | 3 °C/s |
| 熒光通道數(shù) | 最多 5 通道（可選） |
| 檢測(cè)靈敏度 | 單拷貝水平 |
| 定量線性范圍 | 101–10? copies |
| 線性回歸系數(shù) (R2) | ≥ 0.995 |
| 板式通量 | 96 孔/板（標(biāo)配）,，384 孔/板（選配） |
| 數(shù)據(jù)輸出格式 | CSV,、Excel、PDF,、JPEG,、PNG |
| 通訊接口 | USB 2.0 ×2，LAN ×1,，RS-232 ×1 |
| 電源要求 | AC 100–240 V,，50/60 Hz |
| 工作環(huán)境 | 溫度 15–30 °C，濕度 20–80% （無(wú)冷凝） |
| 功耗 | 工作時(shí) ≤ 250 W,；待機(jī) ≤ 10 W |
四,、軟件平臺(tái)與數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
向?qū)浇缑嬉龑?dǎo)設(shè)置板架布局、引物/探針通道及擴(kuò)增程序；
支持梯度 PCR 設(shè)計(jì),，一次試驗(yàn)可同時(shí)測(cè)試 6–12 個(gè)退火溫度,；
模板管理功能，可保存,、導(dǎo)入,、導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)?zāi)０澹瑴p少重復(fù)操作,。
實(shí)時(shí)監(jiān)控
實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線與 Ct 值自動(dòng)計(jì)算,；
多種顯示模式（疊加模式、分組對(duì)比模式）便于多板實(shí)驗(yàn)評(píng)估,；
實(shí)時(shí)熔解曲線,、熒光強(qiáng)度變化曲線。
數(shù)據(jù)處理
定性分析：閾值循環(huán)數(shù)（Ct）判定,，自動(dòng)篩選異常點(diǎn),；
相對(duì)定量：ΔΔCt 法或 Pfaffl 法，預(yù)設(shè)多種內(nèi)參基因庫(kù),；
絕對(duì)定量：標(biāo)準(zhǔn)曲線法,，支持自動(dòng)繪制并擬合；
多重分析：不同通道熒光分離,，支持最多 4–5 重檢測(cè),；
熔解曲線分析：可視化產(chǎn)物特異性，檢測(cè)引物二聚體或非特異擴(kuò)增,。
報(bào)告與導(dǎo)出
自定義報(bào)告模板,，包含實(shí)驗(yàn)信息、圖表和統(tǒng)計(jì)匯總,；
批量導(dǎo)出功能,，一鍵生成多實(shí)驗(yàn)報(bào)告；
數(shù)據(jù)加密與用戶權(quán)限管理,，滿足 GLP/GMP 規(guī)范需求,。
五、典型應(yīng)用領(lǐng)域
基因表達(dá)定量
適用于細(xì)胞因子,、受體,、轉(zhuǎn)錄因子等基因表達(dá)差異分析；
熒光染料與探針雙重標(biāo)記,，針對(duì)低豐度轉(zhuǎn)錄本也可獲得穩(wěn)定 Ct 值,。
病原體核酸檢測(cè)
病毒、細(xì)菌,、真菌等病原微生物定性與定量,；
可配置快速擴(kuò)增程序，初步結(jié)果可在 30–40 min 內(nèi)獲取。
拷貝數(shù)變異與 SNP 分型
使用 TaqMan 探針或 HRM（高分辨率熔解曲線）技術(shù),；
定量檢測(cè)基因組擴(kuò)增或缺失事件,，支持 CNV 分析；
基于熔解曲線差異識(shí)別單核苷酸多態(tài)性（SNP）,。
表觀遺傳學(xué)分析
甲基化特異 PCR（MSP）與甲基化敏感探針?lè)治觯?/p>
結(jié)合亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換后 DNA,，定量評(píng)估甲基化水平。
轉(zhuǎn)基因及 GMO 檢測(cè)
針對(duì)常見(jiàn)轉(zhuǎn)基因片段（35S,、NOS,、Bar 等）進(jìn)行定量；
符合食品安全和監(jiān)管機(jī)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn),，如 ISO 21569,。
六、日常操作與維護(hù)
開(kāi)關(guān)機(jī)流程
開(kāi)機(jī)：連接電源與網(wǎng)絡(luò),，啟動(dòng)軟件后執(zhí)行系統(tǒng)自檢,；
關(guān)機(jī)：在軟件中安全退出后斷電,，避免數(shù)據(jù)丟失,。
試劑與耗材
推薦使用低漂白或無(wú)漂白板材及專用封板膜；
熒光探針,、引物等反應(yīng)體系需在 ?20 °C 存儲(chǔ)并在室溫平衡后使用,。
清潔與消毒
每次實(shí)驗(yàn)后，用無(wú)塵布或鏡頭紙擦拭光學(xué)窗口,；
定期用 70% 乙醇擦拭樣本架底板及蓋板,；
避免液體進(jìn)入機(jī)箱風(fēng)道和電子部件。
校準(zhǔn)與質(zhì)控
溫度校準(zhǔn)：每 6 個(gè)月使用校準(zhǔn)板或標(biāo)準(zhǔn)試劑驗(yàn)證,；
光學(xué)校準(zhǔn)：采用標(biāo)準(zhǔn)熒光染料,，檢查各通道靈敏度與線性度；
軟件更新：定期檢查并安裝新版固件與分析軟件,。
故障排查
軟件錯(cuò)誤：參考日志文件或重安裝軟件,；
硬件報(bào)警：根據(jù)錯(cuò)誤代碼手冊(cè)執(zhí)行清潔或更換部件；
無(wú)法升溫或溫差過(guò)大：檢查 Peltier 模塊及散熱風(fēng)扇,。
七,、二手設(shè)備驗(yàn)收要點(diǎn)
外觀與機(jī)械部件
檢查機(jī)箱無(wú)明顯碰撞痕跡；
樣本架與蓋板運(yùn)動(dòng)順暢,，無(wú)卡滯,。
溫控與光學(xué)測(cè)試
執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)梯度 PCR，記錄升降溫曲線與均一性,；
利用熒光板及陰性對(duì)照檢測(cè)信噪比與線性范圍,。
軟件功能驗(yàn)證
創(chuàng)建新實(shí)驗(yàn)、加載模板、運(yùn)行擴(kuò)增并導(dǎo)出報(bào)告,；
檢查網(wǎng)絡(luò)連接和遠(yuǎn)程監(jiān)控功能,。
配件與文檔
樣本架、封板膜,、電源線,、通信線、軟件授權(quán)文件齊全,；
提供最近一次校準(zhǔn)報(bào)告及使用手冊(cè),。
八、典型用戶案例
大學(xué)與研究所：
在腫瘤標(biāo)志基因表達(dá)分析項(xiàng)目中,，同步比較 20+ 個(gè)基因,，月平均運(yùn)行 200 板次，結(jié)果重現(xiàn)性良好,。第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)：
用于轉(zhuǎn)基因作物成分定量分析,，滿足 ISO/IEC 17025 認(rèn)證。公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室：
實(shí)施呼吸道病原體監(jiān)測(cè),，流感高峰期單日檢測(cè)可達(dá) 800 例樣本,。
九、采購(gòu)及配件建議
通量選擇
日常通量 < 50 板/月：標(biāo)準(zhǔn) 96 孔版,；
通量 > 200 板/月：建議選配 384 孔適配器及自動(dòng)上板裝置,。
配件選配
梯度模塊：用于引物退火溫度優(yōu)化；
自動(dòng)化接口：與液體處理機(jī)器人對(duì)接,，減少手動(dòng)操作,。
軟件授權(quán)
標(biāo)配基礎(chǔ)分析模塊；
可選 LIMS 接口,、統(tǒng)計(jì)插件（PCA,、聚類分析等）。
預(yù)算考量
全新機(jī)型與二手設(shè)備在初期投入有差異,；
建議根據(jù)項(xiàng)目周期與預(yù)算綜合評(píng)估,。
十、售后與技術(shù)支持
質(zhì)保期
核心部件（溫控,、光學(xué)） 6 個(gè)月,；
耗材及附件 3 個(gè)月。
培訓(xùn)服務(wù)
包括儀器安裝,、軟件操作,、日常維護(hù)與故障排查；
可安排現(xiàn)場(chǎng)或遠(yuǎn)程培訓(xùn),。
技術(shù)支持
遠(yuǎn)程診斷：實(shí)時(shí)監(jiān)控運(yùn)行狀態(tài),；
現(xiàn)場(chǎng)服務(wù)：簽訂協(xié)議后 48 小時(shí)內(nèi)響應(yīng)（限主要城市）,；
定期校準(zhǔn)與升級(jí)服務(wù)套餐亦可選購(gòu)。
通過(guò)系統(tǒng)化的硬件設(shè)計(jì),、軟件功能和多領(lǐng)域應(yīng)用驗(yàn)證,，LightCycler 480 能滿足科研、臨床及檢測(cè)機(jī)構(gòu)的多種需求,。
