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賽默飛7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Applied Biosystems 7500）介紹
一、概述
賽默飛（Thermo Fisher Scientific）旗下的Applied Biosystems 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（7500 Real-Time PCR System）是一款高性能的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）儀器,。它被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析,、病原檢測、突變檢測,、基因拷貝數(shù)分析等多個(gè)分子生物學(xué)研究和臨床檢測領(lǐng)域,。7500型PCR儀結(jié)合精確的光學(xué)檢測系統(tǒng)、智能化數(shù)據(jù)分析軟件和穩(wěn)定的溫控系統(tǒng),，可提供高靈敏度和高通量的qPCR檢測,，滿足科研,、醫(yī)療及工業(yè)實(shí)驗(yàn)室的需求。
二,、主要特點(diǎn)
7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在光學(xué)系統(tǒng),、檢測通道、數(shù)據(jù)分析等方面具有明顯的優(yōu)勢,，適用于各種PCR實(shí)驗(yàn),。
1. 高精度光學(xué)檢測系統(tǒng)
優(yōu)化的光學(xué)設(shè)計(jì)，能夠準(zhǔn)確采集熒光信號,，提高檢測靈敏度,。
支持多種熒光檢測方式，兼容SYBR Green染料和TaqMan探針技術(shù),。
快速數(shù)據(jù)采集,，提高擴(kuò)增曲線的準(zhǔn)確性，確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性,。
2. 靈活的熒光檢測通道
支持5個(gè)熒光通道,，能夠進(jìn)行多重PCR實(shí)驗(yàn)，檢測多個(gè)目標(biāo)基因,。
兼容多種熒光染料（FAM™,、VIC®、ROX™,、SYBR® Green等）,，適用于不同類型的實(shí)驗(yàn)。
3. 精確的溫控系統(tǒng)
高效的Peltier熱循環(huán)系統(tǒng),，確保樣品孔間溫度均一性,，提高擴(kuò)增的重復(fù)性和可靠性。
快速升降溫,，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間,，提高工作效率。
4. 強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析軟件
Applied Biosystems專用軟件,，支持標(biāo)準(zhǔn)曲線分析,、相對定量分析（2-ΔΔCt方法）、絕對定量分析等數(shù)據(jù)處理功能,。
直觀的用戶界面,，可自動(dòng)計(jì)算Ct值、熔解曲線分析,，支持導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告,。
5. 兼容多種樣本板型
支持96孔板，適用于中等通量實(shí)驗(yàn)需求。
兼容各種PCR反應(yīng)體系,，包括TaqMan探針法,、SYBR Green熒光染料法。
6. 可靠的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性
通過優(yōu)化的檢測和溫控系統(tǒng),，保證數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和重復(fù)性,，適用于科研實(shí)驗(yàn)、臨床診斷,、環(huán)境檢測等領(lǐng)域,。
三,、技術(shù)規(guī)格
| 參數(shù) | 詳細(xì)信息 |
|---|---|
| 熒光通道 | 5個(gè)（支持多重PCR） |
| 檢測模式 | SYBR Green,、TaqMan探針 |
| PCR反應(yīng)板 | 96孔板 |
| 溫控精度 | ±0.25°C |
| 熒光檢測范圍 | FAM™, VIC®, ROX™, NED™, TAMRA™ |
| 數(shù)據(jù)分析 | 絕對定量、相對定量,、基因分型,、熔解曲線分析 |
| 軟件支持 | Applied Biosystems 7500 Software |
| 升降溫速率 | 3.5°C/s |
四、適用領(lǐng)域
1. 基因表達(dá)分析
通過實(shí)時(shí)PCR檢測特定基因的表達(dá)水平,，適用于生物醫(yī)學(xué)研究,、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。
可使用SYBR Green染料法或TaqMan探針法進(jìn)行高靈敏度的基因表達(dá)定量分析,。
2. 病原體檢測
7500型PCR儀可檢測細(xì)菌,、病毒（如SARS-CoV-2、流感病毒,、HIV等）,，適用于傳染病檢測。
高靈敏度檢測可確保低拷貝病原DNA/RNA的可靠檢測,。
3. 突變檢測與基因分型
適用于SNP（單核苷酸多態(tài)性）分析,、點(diǎn)突變檢測、腫瘤基因突變研究等,。
結(jié)合TaqMan探針技術(shù),，可實(shí)現(xiàn)高特異性的基因分型分析。
4. 司法鑒定與食品安全
適用于DNA指紋鑒定,、食品安全檢測（如轉(zhuǎn)基因食品檢測）,。
通過實(shí)時(shí)PCR技術(shù)，可快速鑒定樣本來源,，提高實(shí)驗(yàn)效率,。
五、操作流程
7500型PCR儀的使用流程如下：
1. 樣品準(zhǔn)備
提取DNA或RNA,，進(jìn)行濃度測定和純化,。
選擇合適的PCR反應(yīng)體系（SYBR Green或TaqMan探針）。
配制PCR反應(yīng)液，包括引物,、探針,、dNTPs、PCR緩沖液,、熒光染料或探針,。
2. 加樣與PCR板準(zhǔn)備
將PCR反應(yīng)體系分裝至96孔PCR板，每孔體積通常為10-50 µL,。
使用封膜密封PCR板,，避免交叉污染。
3. 運(yùn)行PCR程序
在7500 PCR儀的軟件中創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)：
設(shè)定PCR反應(yīng)條件（變性,、退火,、延伸）。
選擇熒光通道并設(shè)置數(shù)據(jù)采集模式,。
啟動(dòng)PCR實(shí)驗(yàn),，實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號變化。
4. 數(shù)據(jù)分析
通過儀器自帶的軟件分析Ct值,，計(jì)算基因表達(dá)水平或DNA拷貝數(shù),。
生成擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線,，進(jìn)行數(shù)據(jù)比對,。
六、數(shù)據(jù)分析
1. Ct值計(jì)算
**Ct（閾值循環(huán)數(shù)）**表示PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測閾值,，Ct值越低,，表示初始DNA/RNA濃度越高。
用于基因表達(dá)分析,、病原體檢測等實(shí)驗(yàn),。
2. 絕對定量分析
通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算DNA/RNA拷貝數(shù)，適用于病毒載量檢測等研究,。
3. 相對定量分析（ΔΔCt法）
比較實(shí)驗(yàn)組和對照組基因表達(dá)水平,，廣泛應(yīng)用于藥物研究、癌癥生物標(biāo)志物分析,。
七,、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
確保樣品純度：DNA/RNA質(zhì)量影響擴(kuò)增效率，應(yīng)避免蛋白或其他雜質(zhì)污染,。
正確設(shè)置熒光通道：不同的熒光探針需要匹配相應(yīng)的檢測通道,。
避免交叉污染：使用無RNA/DNA酶的移液器和試劑，嚴(yán)格遵循無菌操作流程,。
優(yōu)化引物設(shè)計(jì)：避免二聚體形成,，提高PCR特異性和擴(kuò)增效率,。
八、總結(jié)
賽默飛7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀憑借高靈敏度的熒光檢測,、精準(zhǔn)的溫控系統(tǒng),、強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析功能，已成為基因組研究,、病原檢測,、臨床診斷等領(lǐng)域的常見PCR設(shè)備。其多通道檢測,、兼容多種熒光探針,、支持高通量檢測的特點(diǎn)，使其適用于從基礎(chǔ)研究到應(yīng)用檢測的各種實(shí)驗(yàn)需求,。通過合理優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,，7500型PCR儀能夠提供高精度、穩(wěn)定可靠的PCR定量分析結(jié)果,，為科研人員和臨床醫(yī)生提供強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)支持,。
