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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
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羅氏實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀介紹
一,、品牌背景與發(fā)展歷程
羅氏（Roche）是一家總部位于瑞士巴塞爾的跨國醫(yī)療健康企業(yè),，長(zhǎng)期專注于體外診斷、制藥和生物技術(shù)領(lǐng)域,。在分子診斷領(lǐng)域,，羅氏基于其長(zhǎng)期的研發(fā)積淀，推出了多代實(shí)時(shí)熒光定量PCR產(chǎn)品,，包括著名的LightCycler系列和Cobas系列,，廣泛應(yīng)用于科研、臨床檢測(cè),、公共衛(wèi)生及生物制藥等領(lǐng)域,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）是一種在PCR反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)產(chǎn)物擴(kuò)增過程的方法，結(jié)合熒光信號(hào)檢測(cè)和熱循環(huán)控制,，能夠?qū)NA/RNA模板進(jìn)行精確定量,。羅氏在該領(lǐng)域的技術(shù)持續(xù)更新，在檢測(cè)靈敏度,、反應(yīng)速度,、數(shù)據(jù)處理能力等方面做出了多項(xiàng)技術(shù)創(chuàng)新。
二,、產(chǎn)品系列概述
羅氏目前主要提供以下幾類實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)：
1. LightCycler 系列
LightCycler 96
LightCycler 96 是一款面向常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需求設(shè)計(jì)的qPCR系統(tǒng),，支持96孔板反應(yīng)格式，適合常規(guī)樣本通量的定量分析,。
主要特點(diǎn)：
四通道熒光檢測(cè)系統(tǒng),，支持多重PCR反應(yīng)；
輕量化設(shè)計(jì),，適合實(shí)驗(yàn)室靈活部署,；
預(yù)設(shè)模板與用戶自定義程序兼容；
配套的軟件具備實(shí)時(shí)監(jiān)控,、自動(dòng)數(shù)據(jù)分析和多種輸出格式,。
LightCycler 480
LightCycler 480 支持高通量需求，配置多通道檢測(cè)系統(tǒng),，適用于大型科研項(xiàng)目與臨床樣本批量檢測(cè),。
主要參數(shù)：
可選擇96孔或384孔反應(yīng)模塊；
支持最大六通道熒光檢測(cè),；
具備高溫均一性與穩(wěn)定性,，確保擴(kuò)增效率；
軟件支持熔解曲線分析,、基因分型,、拷貝數(shù)分析,、表達(dá)量差異分析等功能。
2. Cobas z 480 系統(tǒng)
Cobas z 480 是羅氏為體外診斷（IVD）市場(chǎng)推出的臨床級(jí)qPCR平臺(tái),，支持自動(dòng)化數(shù)據(jù)處理,、樣本追蹤與質(zhì)量控制，常用于病毒載量檢測(cè),、病原體鑒定與遺傳檢測(cè),。
技術(shù)特征：
全封閉熒光檢測(cè)系統(tǒng)，有效控制背景干擾,；
與羅氏Cobas 4800自動(dòng)化樣本處理系統(tǒng)兼容,；
支持CE-IVD認(rèn)證試劑運(yùn)行；
自動(dòng)化軟件流程管理,，符合實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（LIS）對(duì)接需求,。
三,、關(guān)鍵技術(shù)與性能參數(shù)
1. 精準(zhǔn)的溫控系統(tǒng)
羅氏qPCR儀采用高性能半導(dǎo)體熱控技術(shù),，結(jié)合實(shí)時(shí)反饋機(jī)制，實(shí)現(xiàn)溫度梯度快速變化與高均一性控制。這對(duì)于擴(kuò)增曲線的準(zhǔn)確繪制與熔解曲線的分辨能力具有關(guān)鍵意義,。
控溫精度：±0.2°C
孔間溫差：< ±0.4°C（典型值）
升降溫速率：最高可達(dá)4.4°C/s（依據(jù)具體型號(hào)）
2. 多重?zé)晒鈾z測(cè)能力
熒光信號(hào)采集模塊采用高靈敏CCD或PMT系統(tǒng)，結(jié)合濾光片選擇和熒光染料兼容列表，支持多重檢測(cè),。
支持SYBR Green,、TaqMan、Scorpion、Molecular Beacon等檢測(cè)體系；
實(shí)時(shí)繪制擴(kuò)增曲線，動(dòng)態(tài)監(jiān)控產(chǎn)物形成過程；
熔解曲線分析功能可區(qū)分不同產(chǎn)物或基因型,。
3. 數(shù)據(jù)分析與輸出
羅氏配套的軟件系統(tǒng)界面清晰,，功能多樣，支持以下分析模塊：
標(biāo)準(zhǔn)曲線法與相對(duì)定量法
ΔΔCt 法表達(dá)量分析
SNP基因分型
拷貝數(shù)變異分析（CNV）
質(zhì)量控制圖譜輸出與批次追蹤記錄
分析結(jié)果可導(dǎo)出為PDF,、Excel,、XML等格式，方便數(shù)據(jù)共享和歸檔,。
四,、應(yīng)用領(lǐng)域與典型場(chǎng)景
1. 臨床檢測(cè)
羅氏qPCR系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于病毒核酸檢測(cè)（如HBV、HCV,、HIV等）,、遺傳病篩查、癌癥標(biāo)志物檢測(cè)及微生物感染的快速鑒定。其IVD認(rèn)證產(chǎn)品線支持從樣本前處理到結(jié)果出具的自動(dòng)化閉環(huán)流程,。
2. 科學(xué)研究
在分子生物學(xué),、免疫學(xué)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等基礎(chǔ)研究中,，qPCR是評(píng)估基因表達(dá)的常用工具。LightCycler系列支持靈活設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程，滿足復(fù)雜實(shí)驗(yàn)需求,。
3. 藥物開發(fā)與生物制藥
用于基因表達(dá)定量分析,、藥物篩選、疫苗研發(fā)、穩(wěn)定性檢測(cè)和殘留DNA檢測(cè),。通過與LIMS系統(tǒng)對(duì)接，可滿足GMP與質(zhì)量體系審計(jì)需求,。
4. 公共衛(wèi)生與食品安全
在突發(fā)疫情響應(yīng),、食品中致病微生物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因成分篩查等方面,，qPCR系統(tǒng)具備快速檢測(cè)與高通量篩選能力,。
五,、配套試劑與耗材
羅氏提供系列配套試劑盒與耗材，包括：
FastStart TaqMan Probe Master：用于探針法qPCR反應(yīng),；
SYBR Green Master Mix：適合染料法定量檢測(cè),；
LightCycler專用反應(yīng)板與密封膜：適配于不同孔板格式；
IVD認(rèn)證的病原體檢測(cè)試劑：如Cytomegalovirus,、Clostridium difficile等,。
這些耗材與儀器配套設(shè)計(jì)，確保反應(yīng)性能穩(wěn)定,，并減少實(shí)驗(yàn)誤差,。
六、操作流程簡(jiǎn)述
以下為典型實(shí)驗(yàn)流程：
樣本準(zhǔn)備：提取DNA/RNA,，并反轉(zhuǎn)錄（如需要）,。
反應(yīng)體系配置：配制Master Mix，加入模板及引物探針,。
程序設(shè)置：在軟件中設(shè)置熱循環(huán)參數(shù)與熒光采集通道,。
運(yùn)行檢測(cè)：開始反應(yīng)，實(shí)時(shí)獲取擴(kuò)增與熔解曲線,。
數(shù)據(jù)分析：利用內(nèi)置軟件完成Ct值判讀,、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制與相對(duì)表達(dá)分析。
七,、維護(hù)與質(zhì)量控制
為了確保儀器長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行,，羅氏提供：
定期校準(zhǔn)與性能驗(yàn)證方案（IQ/OQ/PQ）
軟件自動(dòng)更新與數(shù)據(jù)備份功能
故障報(bào)警系統(tǒng)與遠(yuǎn)程技術(shù)支持
清洗維護(hù)包與認(rèn)證培訓(xùn)服務(wù)
用戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）制定清潔與保養(yǎng)周期。
八,、結(jié)語
羅氏實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)在精準(zhǔn)度,、兼容性、通量與自動(dòng)化方面為實(shí)驗(yàn)室提供了多樣化選擇,。無論是在基礎(chǔ)研究還是臨床應(yīng)用中,，qPCR技術(shù)作為核酸定量的重要手段，在現(xiàn)代生物技術(shù)體系中占據(jù)重要地位,。
隨著生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR平臺(tái)的標(biāo)準(zhǔn)化、智能化和自動(dòng)化趨勢(shì)將進(jìn)一步推動(dòng)其廣泛應(yīng)用,，并支持更高質(zhì)量的數(shù)據(jù)生成與研究探索,。
