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賽默飛ABI 7500實時熒光定量PCR儀技術介紹
一、設備概述
ABI 7500實時熒光定量PCR儀是Thermo Fisher Scientific旗下Applied Biosystems系列的一款用于核酸定量分析的實驗設備,。該系統(tǒng)集成了高精度溫控模塊,、熒光檢測光學系統(tǒng)與分析軟件，可用于多種分子生物學實驗中的DNA,、RNA擴增與定量分析,，適用于科研,、臨床輔助檢測及教學實驗等場景,。
本儀器采用基于TaqMan探針和SYBR Green等熒光染料的實時檢測技術，在反應過程中實時監(jiān)測熒光信號變化,，以推算擴增產物的起始拷貝數(shù),，從而實現(xiàn)對目標基因的絕對或相對定量。
二,、主要技術參數(shù)
反應孔數(shù)與反應體系
配備標準96孔反應模塊,，適配標準0.2 mL PCR管或板；
反應體系體積范圍：10–100 μL,。
溫控系統(tǒng)
采用Peltier元件控溫,，升降溫速率可達1.6°C/s；
溫控精度：±0.25°C,；
均一性（Uniformity）：<0.5°C（在90分鐘PCR程序末端）,；
設定溫度范圍：4°C至100°C；
熱蓋功能可調，防止樣品蒸發(fā),。
光學檢測系統(tǒng)
配備高強度氙燈（Xenon Lamp）作為激發(fā)光源,；
五通道檢測，支持多重熒光標記（FAM,、VIC,、ROX、SYBR,、TAMRA等）,；
熒光檢測采用多通道濾光片系統(tǒng)，實時采集反應曲線,；
數(shù)據(jù)采集精度高,，可實現(xiàn)單拷貝檢測。
軟件系統(tǒng)
使用SDS軟件（System Detection Software）進行實驗設置與結果分析,；
支持Ct值分析,、標準曲線構建、絕對/相對定量分析,、基因表達分析,、SNP分型、熔解曲線分析等功能,；
數(shù)據(jù)格式兼容性好,，可導出為Excel、CSV等格式,，便于進一步統(tǒng)計分析,；
支持圖形可視化、模板管理和自動報告生成,。
三,、系統(tǒng)組成與工作原理
組成結構
主機：包含溫控模塊、熒光激發(fā)與檢測系統(tǒng),、自動熱蓋,；
控制終端：PC端軟件連接主機進行控制與數(shù)據(jù)分析；
電源與通信接口：支持USB連接和LAN網絡,；
軟件套件：含標準實驗模板,、數(shù)據(jù)管理模塊、統(tǒng)計分析工具,。
工作流程
準備反應體系（包括引物,、探針、模板,、反應緩沖液）,；
裝載PCR反應板至儀器,；
設置PCR程序及熒光采集參數(shù)；
系統(tǒng)按預設程序升溫,、擴增并采集熒光信號,；
通過軟件進行結果分析，如Ct值計算,、標準曲線繪制等,。
檢測機制
熒光信號由特定波長激發(fā)并由對應波長濾光片檢測；
每個循環(huán)結束時采集熒光強度,，生成擴增曲線,；
熒光信號與擴增產物數(shù)量成正比；
使用參考染料（如ROX）進行信號校正,，確保結果穩(wěn)定,。
四、實驗應用舉例
基因表達定量分析
常用于mRNA水平的相對表達分析,；
通過ΔΔCt法評估處理組與對照組間的表達變化,；
可用于細胞應答研究、基因功能驗證,、藥物作用機制研究,。
基因分型與突變檢測
利用SNP探針進行個體基因型判別；
可識別單堿基突變,、插入缺失等小范圍變異,；
適用于遺傳疾病研究與個體化醫(yī)學篩查。
病毒載量檢測
對病毒RNA/DNA進行絕對定量,，評估感染程度,；
應用于HIV、HBV,、SARS-CoV-2等臨床監(jiān)測,；
支持通過外標曲線精確測算目標序列拷貝數(shù)。
轉基因成分檢測
檢測GMO農產品中外源基因存在與含量,；
可用于農業(yè)監(jiān)管,、食品安全與貿易合規(guī),。
微生物檢測與菌群分析
快速檢測特定微生物,；
可進行定性篩查或定量評價；
支持16S rRNA等目標序列分析,。
五,、設備操作要點與維護建議
操作規(guī)范
嚴格控制反應體積、試劑濃度及移液準確性,；
每次實驗前需校準熱蓋與熒光檢測系統(tǒng),；
保持儀器通風良好,、無灰塵污染。
維護要點
定期更換光源燈泡并校準光路,；
檢查并清潔濾光片及熱蓋,；
軟件需定期更新，避免兼容性問題,；
長期不使用時建議拔除電源,，并進行防潮處理。
六,、技術優(yōu)勢與注意事項
優(yōu)勢特點
操作流程標準化,，適合多用戶共享平臺；
軟件界面清晰,，易于設置與分析,；
檢測靈敏度高，適合低拷貝序列定量,；
支持多重熒光檢測,，節(jié)省時間與樣本量。
常見問題及規(guī)避
空白孔熒光異常：檢查污染或反應體系配置錯誤,；
熔解曲線異常：排查引物二聚體,、污染擴增等；
弱陽性/擴增失?。簝?yōu)化引物,、退火溫度或酶系統(tǒng)。
七,、總結與適用性評估
ABI 7500實時熒光定量PCR系統(tǒng)憑借其穩(wěn)定的控溫性能,、靈敏的熒光檢測能力及功能完善的軟件平臺，在多種分子生物實驗中具有廣泛適用性,。其標準化配置與模塊化功能可滿足實驗室對數(shù)據(jù)可重復性與檢測精度的要求,。作為一款成熟的實時定量PCR平臺，該設備尤其適合需要中等通量,、標準分析功能的科研單位,、醫(yī)學檢驗機構和高校教學實驗室。
