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伯樂電泳槽的使用方法

2025-1-2  閱讀(226)

分享:

伯樂電泳槽的使用方法

伯樂電泳槽(如 16580011658003)是一種廣泛用于核酸(DNA、RNA)和蛋白質(zhì)分離的實驗設備,。以下將詳細介紹伯樂電泳槽的使用方法,從設備準備到實驗完成的每個步驟都涵蓋其中,,以幫助實驗人員高效,、安全地操作該設備。


一,、設備準備

1.1 檢查設備

  • 確保電泳槽的所有組件(凝膠托架,、電極組件、緩沖液槽等)完整無損,。

  • 檢查電極線連接無破損,,確保實驗安全。

  • 確保實驗環(huán)境干燥,,避免設備短路,。

1.2 選擇緩沖液

根據(jù)實驗目標選擇適合的緩沖液:

  • 核酸實驗:使用 TAE(Tris-Acetate-EDTA)或 TBE(Tris-Borate-EDTA)緩沖液。

  • 蛋白質(zhì)實驗:使用 SDS-Tris-Glycine 緩沖液,。


二,、凝膠制備

2.1 核酸實驗(瓊脂糖凝膠)

  1. 準備瓊脂糖溶液

    • 根據(jù)目標片段大小,選擇適合的濃度(通常 0.8%-2%),。

    • 例如:分離大片段 DNA(>1000 bp)用 0.8%-1% 的瓊脂糖,;分離小片段 DNA(<500 bp)用 1.5%-2%。

    • 稱取適量瓊脂糖粉末,,加入緩沖液(如 TAE 或 TBE),,攪拌均勻。

  2. 加熱溶解

    • 在微波爐中加熱瓊脂糖混合液,,直至溶解(無顆粒),。

    • 冷卻至約 50℃。

  3. 倒入凝膠托架

    • 將凝膠溶液倒入凝膠托架中,,插入梳子(形成樣品槽),,靜置約 20-30 分鐘直至凝膠固化,。

2.2 蛋白質(zhì)實驗(聚丙烯酰胺凝膠)

  1. 選擇合適的預制膠或自制膠

    • 使用伯樂的 Ready Gel(貨號:1610150)預制膠,節(jié)省時間,。

    • 若自制,,按照目標分離分子量配置分離膠和濃縮膠,澆注至 Mini-PROTEAN 電泳槽內(nèi),。

  2. 安裝凝膠

    • 將固化后的聚丙烯酰胺凝膠固定在伯樂電泳槽的凝膠夾上,。


三、樣品準備

3.1 樣品處理

  • 核酸樣品

    • 使用 DNA 上樣緩沖液(如 6X Loading Dye)與樣品混合,。

    • 緩沖液通常含有甘油或溴酚藍,,可提高樣品密度并便于追蹤遷移進程。

  • 蛋白質(zhì)樣品

    • 使用 SDS 上樣緩沖液,,將蛋白樣品變性處理(通常需 95℃ 水浴加熱 5 分鐘),。

    • 加入染料(如溴酚藍)以便于電泳過程中觀察。

3.2 樣品加樣

  1. 用加樣槍將樣品緩慢注入凝膠樣品槽,,避免氣泡進入,。

  2. 在最后一個樣品槽中加入分子量標準 Marker(DNA Ladder 或蛋白質(zhì) Marker),以對比目標片段大小,。


四,、電泳運行

4.1 安裝電泳槽

  1. 將凝膠托架安裝到電泳槽中,確保凝膠正確放置,。

  2. 加入緩沖液至液面,,確保緩沖液覆蓋凝膠并接觸電極。

4.2 連接電源

  1. 將電泳槽連接到伯樂 PowerPac 電源(如 1645050),。

  2. 確保電極線紅色接正極,,黑色接負極。

4.3 設置電壓和運行時間

  • 核酸實驗

    • 設置電壓為 50-150 V,,運行時間 30-90 分鐘,。

    • 根據(jù) DNA 片段大小調(diào)整運行時間,染料需運行至凝膠 2/3 處,。

  • 蛋白質(zhì)實驗

    • 設置電壓為 100-200 V,,運行時間 30-60 分鐘。

4.4 運行監(jiān)控

  • 實驗過程中,,觀察溴酚藍或其他染料的遷移情況,。

  • 定期檢查緩沖液液位,確保電泳過程中不會干涸,。


五,、實驗完成與結(jié)果處理

5.1 停止電泳

  1. 關閉電源,斷開電極線,。

  2. 小心取出凝膠托架,。

5.2 核酸實驗染色

  1. 將瓊脂糖凝膠浸入染色液中(如 Ethidium Bromide(EB)SYBR Green),。

    • EB 染色:浸泡 15-30 分鐘后脫色。

    • SYBR Green:快速染色,,靈敏度更高,。

  2. 使用脫色液(如去離子水)清洗凝膠,去除背景染色,。

5.3 蛋白質(zhì)實驗染色

  1. 將聚丙烯酰胺凝膠浸入染色液(如 考馬斯亮藍銀染液),。

  2. 根據(jù)染色液說明,完成染色和脫色步驟,。

5.4 結(jié)果觀察

  1. 使用伯樂的成像系統(tǒng)(如 Gel Doc EZ System,,貨號:1708195)觀察凝膠條帶。

  2. 分析條帶的分子量和樣品濃度,,記錄實驗結(jié)果,。


六、清潔與維護

6.1 清潔設備

  1. 倒掉緩沖液,,用去離子水清洗緩沖液槽。

  2. 拆卸電極組件,,用濕布擦拭干凈,。

6.2 檢查組件

  • 檢查電極線和電泳槽是否有損壞或老化。

  • 如發(fā)現(xiàn)異常,,及時更換或聯(lián)系供應商維修,。

6.3 存放設備

  • 將設備存放在干燥、無塵的環(huán)境中,,避免電極組件長期接觸水分,。


七、常見問題及解決方法

7.1 電泳條帶彎曲

  • 原因:電場不均或緩沖液液位不足,。

  • 解決:檢查緩沖液覆蓋是否完,,確保電泳槽水平放置。

7.2 條帶擴散

  • 原因:運行時間過長或緩沖液溫度過高,。

  • 解決:縮短運行時間或更換冷卻緩沖液,。

7.3 樣品未遷移

  • 原因:電極線連接錯誤或電壓設置不當。

  • 解決:檢查電極連接,,確保正負極接線無誤,。


總結(jié)

伯樂電泳槽操作簡單、高效,,但需要嚴格遵守實驗規(guī)范,,確保實驗結(jié)果準確無誤。以上使用方法適用于伯樂的各種電泳槽設備(如 16580011658003),,如果在使用過程中遇到特殊問題,,建議參考產(chǎn)品手冊或聯(lián)系技術支持團隊,。通過規(guī)范操作,您將輕松實現(xiàn)核酸或蛋白質(zhì)的精準分離與分析,!


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