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伯樂電泳槽的使用方法
伯樂電泳槽(如 1658001 和 1658003)是一種廣泛用于核酸(DNA、RNA)和蛋白質(zhì)分離的實驗設備,。以下將詳細介紹伯樂電泳槽的使用方法,從設備準備到實驗完成的每個步驟都涵蓋其中,,以幫助實驗人員高效,、安全地操作該設備。
一,、設備準備
1.1 檢查設備
確保電泳槽的所有組件(凝膠托架,、電極組件、緩沖液槽等)完整無損,。
檢查電極線連接無破損,,確保實驗安全。
確保實驗環(huán)境干燥,,避免設備短路,。
1.2 選擇緩沖液
根據(jù)實驗目標選擇適合的緩沖液:
核酸實驗:使用 TAE(Tris-Acetate-EDTA)或 TBE(Tris-Borate-EDTA)緩沖液。
蛋白質(zhì)實驗:使用 SDS-Tris-Glycine 緩沖液,。
二,、凝膠制備
2.1 核酸實驗(瓊脂糖凝膠)
準備瓊脂糖溶液:
根據(jù)目標片段大小,選擇適合的濃度(通常 0.8%-2%),。
例如:分離大片段 DNA(>1000 bp)用 0.8%-1% 的瓊脂糖,;分離小片段 DNA(<500 bp)用 1.5%-2%。
稱取適量瓊脂糖粉末,,加入緩沖液(如 TAE 或 TBE),,攪拌均勻。
加熱溶解:
在微波爐中加熱瓊脂糖混合液,,直至溶解(無顆粒),。
冷卻至約 50℃。
倒入凝膠托架:
將凝膠溶液倒入凝膠托架中,,插入梳子(形成樣品槽),,靜置約 20-30 分鐘直至凝膠固化,。
2.2 蛋白質(zhì)實驗(聚丙烯酰胺凝膠)
選擇合適的預制膠或自制膠:
使用伯樂的 Ready Gel(貨號:1610150)預制膠,節(jié)省時間,。
若自制,,按照目標分離分子量配置分離膠和濃縮膠,澆注至 Mini-PROTEAN 電泳槽內(nèi),。
安裝凝膠:
將固化后的聚丙烯酰胺凝膠固定在伯樂電泳槽的凝膠夾上,。
三、樣品準備
3.1 樣品處理
核酸樣品:
使用 DNA 上樣緩沖液(如 6X Loading Dye)與樣品混合,。
緩沖液通常含有甘油或溴酚藍,,可提高樣品密度并便于追蹤遷移進程。
蛋白質(zhì)樣品:
使用 SDS 上樣緩沖液,,將蛋白樣品變性處理(通常需 95℃ 水浴加熱 5 分鐘),。
加入染料(如溴酚藍)以便于電泳過程中觀察。
3.2 樣品加樣
用加樣槍將樣品緩慢注入凝膠樣品槽,,避免氣泡進入,。
在最后一個樣品槽中加入分子量標準 Marker(DNA Ladder 或蛋白質(zhì) Marker),以對比目標片段大小,。
四,、電泳運行
4.1 安裝電泳槽
將凝膠托架安裝到電泳槽中,確保凝膠正確放置,。
加入緩沖液至液面,,確保緩沖液覆蓋凝膠并接觸電極。
4.2 連接電源
將電泳槽連接到伯樂 PowerPac 電源(如 1645050),。
確保電極線紅色接正極,,黑色接負極。
4.3 設置電壓和運行時間
核酸實驗:
設置電壓為 50-150 V,,運行時間 30-90 分鐘,。
根據(jù) DNA 片段大小調(diào)整運行時間,染料需運行至凝膠 2/3 處,。
蛋白質(zhì)實驗:
設置電壓為 100-200 V,,運行時間 30-60 分鐘。
4.4 運行監(jiān)控
實驗過程中,,觀察溴酚藍或其他染料的遷移情況,。
定期檢查緩沖液液位,確保電泳過程中不會干涸,。
五,、實驗完成與結(jié)果處理
5.1 停止電泳
關閉電源,斷開電極線,。
小心取出凝膠托架,。
5.2 核酸實驗染色
將瓊脂糖凝膠浸入染色液中(如 Ethidium Bromide(EB) 或 SYBR Green),。
EB 染色:浸泡 15-30 分鐘后脫色。
SYBR Green:快速染色,,靈敏度更高,。
使用脫色液(如去離子水)清洗凝膠,去除背景染色,。
5.3 蛋白質(zhì)實驗染色
將聚丙烯酰胺凝膠浸入染色液(如 考馬斯亮藍 或 銀染液),。
根據(jù)染色液說明,完成染色和脫色步驟,。
5.4 結(jié)果觀察
使用伯樂的成像系統(tǒng)(如 Gel Doc EZ System,,貨號:1708195)觀察凝膠條帶。
分析條帶的分子量和樣品濃度,,記錄實驗結(jié)果,。
六、清潔與維護
6.1 清潔設備
倒掉緩沖液,,用去離子水清洗緩沖液槽。
拆卸電極組件,,用濕布擦拭干凈,。
6.2 檢查組件
檢查電極線和電泳槽是否有損壞或老化。
如發(fā)現(xiàn)異常,,及時更換或聯(lián)系供應商維修,。
6.3 存放設備
將設備存放在干燥、無塵的環(huán)境中,,避免電極組件長期接觸水分,。
七、常見問題及解決方法
7.1 電泳條帶彎曲
原因:電場不均或緩沖液液位不足,。
解決:檢查緩沖液覆蓋是否完,,確保電泳槽水平放置。
7.2 條帶擴散
原因:運行時間過長或緩沖液溫度過高,。
解決:縮短運行時間或更換冷卻緩沖液,。
7.3 樣品未遷移
原因:電極線連接錯誤或電壓設置不當。
解決:檢查電極連接,,確保正負極接線無誤,。
總結(jié)
伯樂電泳槽操作簡單、高效,,但需要嚴格遵守實驗規(guī)范,,確保實驗結(jié)果準確無誤。以上使用方法適用于伯樂的各種電泳槽設備(如 1658001 和 1658003),,如果在使用過程中遇到特殊問題,,建議參考產(chǎn)品手冊或聯(lián)系技術支持團隊,。通過規(guī)范操作,您將輕松實現(xiàn)核酸或蛋白質(zhì)的精準分離與分析,!