聯(lián)系電話
杭州實(shí)了個驗(yàn)生物科技有限公司
中級會員·2年
- 聯(lián)系人：
- 王志文
- 電話：
- 0571-86288209
- 手機(jī)：
- 13158823830
- 地址：
- 杭州市下城區(qū)金通數(shù)字經(jīng)濟(jì)科創(chuàng)園8幢2樓
- 個性化：
- www.shilegeyan.cn
- 網(wǎng)址：
- www.shilegeyan.cn
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
實(shí)時熒光定量PCR儀（Real-Time Quantitative PCR, qPCR）是一種基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù),，結(jié)合熒光探針技術(shù)實(shí)時監(jiān)測和定量目標(biāo)DNA或RNA擴(kuò)增過程的分子生物學(xué)儀器。與傳統(tǒng)的PCR不同,，實(shí)時熒光定量PCR儀能夠在每個循環(huán)中實(shí)時監(jiān)測熒光信號的變化,，從而準(zhǔn)確地定量目標(biāo)基因的豐度。
一,、工作原理
實(shí)時熒光定量PCR儀通過特定的熒光染料或熒光探針來檢測DNA擴(kuò)增產(chǎn)物,。在PCR反應(yīng)中，隨著DNA鏈的復(fù)制,，熒光信號逐步增強(qiáng),，系統(tǒng)通過測量每個循環(huán)中的熒光強(qiáng)度來跟蹤DNA擴(kuò)增的動態(tài)變化。
1. 熒光染料
使用熒光染料,，如SYBR Green,，當(dāng)染料與雙鏈DNA結(jié)合時，熒光強(qiáng)度顯著增加,。隨著PCR反應(yīng)中DNA產(chǎn)物的逐漸增加,，熒光信號也隨之增強(qiáng),。
2. 熒光探針
另一種方法是使用特定的熒光探針（如TaqMan探針），這些探針特異性地與目標(biāo)序列結(jié)合,，當(dāng)探針被降解時釋放熒光信號,，實(shí)時反映目標(biāo)基因的擴(kuò)增情況。
3. 定量分析
通過設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線,，實(shí)時熒光定量PCR儀能夠根據(jù)熒光信號的變化計(jì)算樣本中目標(biāo)基因的初始拷貝數(shù),，從而實(shí)現(xiàn)精確定量。
二,、實(shí)時熒光定量PCR的優(yōu)勢
實(shí)時監(jiān)測：相較于傳統(tǒng)PCR需要通過電泳等技術(shù)在反應(yīng)結(jié)束后檢測擴(kuò)增產(chǎn)物,，實(shí)時熒光定量PCR可以在反應(yīng)進(jìn)行時實(shí)時檢測和記錄熒光信號，避免了后期處理步驟,，節(jié)省時間和成本,。
高靈敏度：該技術(shù)能夠檢測到低拷貝數(shù)的DNA或RNA，適用于檢測稀有基因或微量病原體,。
定量準(zhǔn)確：實(shí)時定量PCR儀的定量結(jié)果可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到,，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)研究,、病毒載量檢測和基因分型分析等領(lǐng)域,。
高通量分析：現(xiàn)代的實(shí)時熒光定量PCR儀能夠支持多重通道分析，可以同時檢測多個目標(biāo)基因,，大大提高了實(shí)驗(yàn)效率。
三,、應(yīng)用領(lǐng)域
1. 基因表達(dá)分析
實(shí)時熒光定量PCR廣泛用于基因表達(dá)研究,，能夠定量分析不同組織或細(xì)胞中基因的表達(dá)水平，幫助研究人員了解基因的功能和調(diào)控機(jī)制,。
2. 臨床診斷
在臨床上,，qPCR用于檢測病原體的載量，如HIV,、HBV,、HCV等病毒的定量檢測。此外,，它還可用于檢測癌癥相關(guān)基因的突變或表達(dá)水平,，輔助個體化治療的基因檢測。
3. 藥物研發(fā)
在藥物開發(fā)過程中,，實(shí)時熒光定量PCR儀用于評估藥物對目標(biāo)基因的調(diào)控作用,，檢測藥物療效，以及進(jìn)行毒理學(xué)研究,。
4. 環(huán)境監(jiān)測
qPCR可用于環(huán)境樣品中的微生物檢測,，如水質(zhì),、土壤或空氣中的細(xì)菌、病毒等生物污染物的定量分析,。
四,、常見品牌及儀器
實(shí)時熒光定量PCR儀市場上有多個型號，包括Thermo Fisher Scientific（賽默飛）,、Bio-Rad,、Roche、Agilent等,。它們的設(shè)備各有特色,，廣泛應(yīng)用于不同的科研和臨床領(lǐng)域。
五,、總結(jié)
實(shí)時熒光定量PCR儀是一種高度敏感,、準(zhǔn)確和多功能的分子生物學(xué)工具，已成為現(xiàn)代基因研究和臨床檢測中的核心設(shè)備,。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展,，qPCR儀器將繼續(xù)在醫(yī)學(xué)、制藥,、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用,。
