目錄:上海晨曄生物科技有限公司>>技術(shù)服務(wù)>> 肝切除模型
產(chǎn)地類別 | 國產(chǎn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 綜合 |
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肝部分切除基本以30%、50%,、70%和90%肝切除為主,,根據(jù)肝葉比例進行相應(yīng)切除,,但右上葉和右下葉同屬一個功能單位,,兩者有一段融合共用的脈管系統(tǒng),單獨切除其中一部分容易損傷殘留肝葉脈管系統(tǒng)的通暢性,。肝切除對肝再生的刺激強度與所切除肝臟的質(zhì)量有直接的關(guān)系,,切除量大于85%或小于30%均可導(dǎo)致再生緩慢。
構(gòu)建小鼠 70%肝臟切除模型
實驗動物選擇:
小鼠肝臟分葉結(jié)構(gòu)明顯并都有相對獨立的肝靜脈系統(tǒng)和Glisson系統(tǒng),,各肝葉比重相對固定,,便于進行不同比例肝部分切除,且其膽囊解剖更接近人類,。且小鼠大部分肝切除模型是當(dāng)前研究肝臟再生的最佳模型,,可用于模擬肝臟再生的起始、增殖和終止階段,。
肝切除模型造模方法:
(一)用2%異氟的烷氣體麻醉小鼠,。
(二)腹部消毒后,,取劍突下腹部正中豎切口,長度 1.5cm-3cm,,開腹時注意不要損傷腹腔器官組織,,依次切開表皮、肌層及腹膜,,找到肝臟,,用鑷子拉開并固定兩側(cè)腹肌,充分暴露肝臟,。
(三)用眼科剪游離與肝臟相關(guān)的韌帶,先后結(jié)扎肝中葉及左外側(cè)葉并切除,,注意保留膽囊,;結(jié)扎時要靠近肝葉基底,盡量減少肝葉的殘留和對血管的損傷,,結(jié)扎時動作要輕柔,,避免撕扯到肝下的血管。
但值得注意的是,,結(jié)扎中葉時線結(jié)的位置不能太靠近肝上的腔靜脈,,否則會導(dǎo)致靜脈閉塞或狹窄,阻礙殘留的右葉和尾葉的血液回流,,從而導(dǎo)致肝組織的壞死和再生的失敗,。因此,線結(jié)的位置應(yīng)該超過膽囊,,但與上腔靜脈的距離應(yīng)不小于2mm,。
(四)回納剩余肝組織及腹內(nèi)容物,依次縫合關(guān)腹,,縫合后再次消毒切口,。術(shù)后禁食禁水6h。皮下注射5%葡萄糖的注射液替代術(shù)中蒸發(fā)損失,,出血和液體移位中的液體損失,,并作營養(yǎng)用,放置于37℃溫箱復(fù)溫6h,。
(五)以手術(shù)結(jié)束為0h,,根據(jù)分組時間點要求分別于術(shù)后24h、72h,、7d將動物處死,,稱量并記錄各組再生肝臟的重量,取樣,。肝組織收集后迅速-80℃低溫冰箱保存,。
構(gòu)建肝臟缺血再灌注損傷模型
實驗動物選擇
缺血再灌注損傷實驗?zāi)P投噙x用大鼠等嚙齒類動物來建立,。相對與大小鼠而言,小鼠具有飼養(yǎng)成本低,、空間利用率高,、藥劑消耗量小、操作同步性好等優(yōu)點,。
動物品系:Balb/c小鼠,,雄性,周齡為6-8w
造模方法
1,、 術(shù)前12h禁食,,自由飲水。
2,、 腹腔注射麻醉,,麻醉成功后將小鼠平躺在手術(shù)的臺上膠帶固定四肢,將小鼠腹部術(shù)去毛,,用碘酒和75%乙醇術(shù)區(qū)消毒,。
3、 取腹正中切口1cm,,打開腹腔,,小心分離出肝臟供血的門靜脈和肝動脈。
4,、 用無創(chuàng)血管的夾夾閉門靜脈和肝動脈,,0.5min后,肉眼可見阻斷葉明顯變白,,說明阻斷成功,,用止血的鉗夾閉皮膚切口臨時關(guān)閉腹腔,將小鼠放恒溫加熱毯上保溫,。
5,、 完成持續(xù)缺血60min后,重新打開腹腔,,迅速取出血管的夾,,恢復(fù)缺血肝血流,0.5min左右可見缺血區(qū)肝臟由白色逐漸恢復(fù)為鮮紅色表明再灌注成功,,逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關(guān)閉腹腔,,完成手術(shù)。待小鼠清醒后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng),,密切關(guān)注小鼠的狀態(tài)及生存狀況并做好記錄,。
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