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二氧化碳培養(yǎng)箱的無(wú)污染技術(shù)

閱讀:830        發(fā)布時(shí)間:2017/5/22
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二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞或組織在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境,,如穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%),、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4),、較高的相對(duì)飽和濕度(95%),來對(duì)細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置,。

廣泛應(yīng)用于細(xì)胞,、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng),常見于細(xì)胞動(dòng)力學(xué)研究,、哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌物的收集,、各種物理、化學(xué)因素的致癌或毒理效應(yīng),、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)抗體,、體外授精(IVF),、干細(xì)胞、組織工程,、藥物篩選等研究領(lǐng)域,。在生物活體內(nèi),生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護(hù)細(xì)胞或組織,,但是在體外培養(yǎng)時(shí),,沒有任何保護(hù)自己的免疫屏障,。

對(duì)于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數(shù)溫度、CO2和濕度,,大多數(shù)培養(yǎng)箱都能滿足研究實(shí)驗(yàn)的需要,。然而,針對(duì)培養(yǎng)過程中面臨的各種污染源,,各品牌二氧培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同,,因此細(xì)胞體外培養(yǎng)中的威脅實(shí)際上是污染問題。二氧化碳培養(yǎng)箱中的主要污染源:細(xì)菌,、真菌(霉菌和酵母菌),、病毒、支原體以及非同種細(xì)胞對(duì)于細(xì)胞來說,,非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染源的生存,,培養(yǎng)箱本身是不會(huì)辨別的,而細(xì)胞培養(yǎng)中大部分時(shí)間里細(xì)胞都是被放置于培養(yǎng)箱內(nèi),,因此箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關(guān)鍵,!

細(xì)菌:細(xì)菌污染后,培養(yǎng)基1-2天就會(huì)渾濁變黃,,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,,應(yīng)迅速將污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離,滅菌后丟棄,,還要用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),。病毒:由于病毒寄生生存,爆發(fā)后盡快和正常細(xì)胞隔離,,丟棄處理,,相對(duì)來說容易處理,病毒污染對(duì)操作者威脅較大,;盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),,但生產(chǎn)疫苗是不安全的。潛在的病毒污染是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗,、干擾素等生物制品制作中的難題,。

真菌(霉菌和酵母菌):真菌污染后培養(yǎng)液不變渾濁,不象細(xì)菌污染那么容易被發(fā)現(xiàn),,真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)中zui常見的一種污染,;污染后細(xì)胞生長(zhǎng)的比較慢,目前沒有好的抑制方法,,包括現(xiàn)在常用的兩性霉素,,一旦污染容易反復(fù)爆發(fā),尤其孢子很難殺滅。

支原體:支原體污染細(xì)胞后,,不會(huì)使細(xì)胞死亡且可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存,,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著,,細(xì)微變化也可由于傳代,、換液而緩解,外觀上給人以正常感覺,,往往被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)者忽視,,實(shí)則細(xì)胞已經(jīng)受到多方面潛在影響,如引起細(xì)胞變形,,影響DNA合成,,抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等。非同種細(xì)胞:即細(xì)胞交叉污染,,由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開,,往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。目前,,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,,致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。

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