師姐收藏的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧
1. 不管是買的細(xì)胞,,還是別人惠贈的細(xì)胞,,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測是否有支原體污染,;迅速擴(kuò)增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天最好更換一次培養(yǎng)基,。
2. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,,特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染,、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn),,支原體污染的話,細(xì)胞會長的慢,,可以買個(gè)支原體檢測的試劑盒定期檢測一下,。
3. 不同細(xì)胞生長周期不同。有的生長很快,,比如說 MDA-MB-231,,傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢,,比如 BT474,,傳代是一分二,復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長滿,。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中多多摸索,。
4. 對于嬌弱的細(xì)胞,就得細(xì)心呵護(hù),。胰酶消化不能過久,,吹得時(shí)候要輕柔,,離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間,。每天都要去看一下細(xì)胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況,、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況,。記住,是每天,。
操作方面
1. 最好不要和別人共用試劑耗材,,自己準(zhǔn)備一套。自己的東西自己包自己烘干,。槍頭什么的只要有可能污染就換,。
2. 嚴(yán)格無菌操作。操作臺一定要擺個(gè)酒精燈,,所有操作緊密圍繞在酒精燈周圍進(jìn)行,。離開過操作臺的東西再進(jìn)操作臺之前一定要用酒精消毒一遍,稍微烤一下,,別直接放到火上,,離一段距離,。包括一切實(shí)驗(yàn)耗材、儀器,、以及你帶著手套的手,。
3. 水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,,記得要勤換,。身體的各個(gè)部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實(shí)驗(yàn)臺,,又比如培養(yǎng)箱內(nèi)部,。培養(yǎng)箱隔一段時(shí)間用酒精棉擦洗一次。
4. 細(xì)胞房日常的值日清潔是必須的,,此外還要定期熏蒸,。晚上離開的時(shí)候最好給細(xì)胞房照紫外,超凈臺是用完就開,。最好是同一時(shí)間就你一個(gè)人在細(xì)胞房養(yǎng)細(xì)胞,。
5. 動作要既輕柔又有力。動作太重會有一堆一堆的氣泡,,動作太輕就吹不下來,。剛開始的時(shí)候吹細(xì)胞太痛苦了,稍微一下就起泡,。后來就是吹的時(shí)候槍里的培養(yǎng)基不要一次全都壓出來,,留一點(diǎn),槍的最頭部盡量深的在液面以下,。