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       預(yù)防措施：

       在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，潛在的污染途徑主要包括操作技術(shù)和環(huán)境,，其中環(huán)境因素又包括了無(wú)菌試劑和材料、超凈工作臺(tái),、恒溫恒濕培養(yǎng)箱,、水浴鍋和冰箱等。

       一,、操作技術(shù)

       培養(yǎng)操作前：

       ⑴ 個(gè)人衛(wèi)生：進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室時(shí)應(yīng)更換實(shí)驗(yàn)室專用鞋或者穿鞋套,；穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩和手套,，用消毒酒精（75%濃度的乙醇）擦拭雙手,；如果操作者是長(zhǎng)發(fā),，應(yīng)扎于腦后,。

       ⑵ 工作臺(tái)準(zhǔn)備：提前 0.5~1h 打開超凈臺(tái)的紫外燈進(jìn)行消毒；用蘸有消毒酒精的紙巾擦拭超凈臺(tái)的臺(tái)面,、擋板等,。

       ⑶ 試劑準(zhǔn)備：從冷藏室或冷凍室取出所需的培養(yǎng)基等試劑，于37℃水浴鍋中進(jìn)行加熱,；加熱后用消毒酒精擦拭瓶身,，并立馬放入超凈工作臺(tái)內(nèi)。

       須注意的事項(xiàng)有：外套,、背包等物品,，易附著豐富的微生物，不應(yīng)帶入細(xì)胞房,。

       培養(yǎng)操作中：

       ⑴ 臺(tái)面布置：按實(shí)驗(yàn)需要和個(gè)人習(xí)慣,，合理放置試劑,、耗材、儀器等物品,；點(diǎn)燃酒精燈后開始實(shí)驗(yàn)操作,。

       ⑵ 操作：靠近火焰進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作；試劑瓶經(jīng)火焰旋轉(zhuǎn)灼燒后打開,；挑選吸管,，快速的縱向在火焰上來(lái)回移動(dòng)并做 180°旋轉(zhuǎn)；將試劑瓶向吸管傾斜,，吸出所需的液體量,；灼燒瓶頸后，重新蓋上蓋子,；等所有操作完畢后,，擰緊瓶蓋。

       須注意的事項(xiàng)有：操作要準(zhǔn)確,、敏捷、有序,；吸取溶液時(shí),，應(yīng)專管專用，避免交叉污染,；吸管管口要向下傾斜,，以防止液體倒流進(jìn)入移液器內(nèi)發(fā)生污染；盡量減少細(xì)胞和培養(yǎng)基的敞口時(shí)間,；已開口的試劑瓶盡可能的傾斜放置,，防止下落微生物的污染；避免在敞口的細(xì)胞培養(yǎng)皿及培養(yǎng)皿蓋上方操作,；不要面對(duì)工作臺(tái)或二氧化碳培養(yǎng)箱講話或咳嗽,，防止口腔微生物隨唾沫飛入而發(fā)生污染；若發(fā)生外溢,，用蘸有消毒酒精的棉球及時(shí)擦去,。

       培養(yǎng)操作后：

       ⑴ 整理：將試劑放回原來(lái)的存儲(chǔ)位置；整理工作臺(tái)面,，物歸原位,，合理丟棄廢液和廢物。

       ⑵ 消毒：用消毒酒精擦拭臺(tái)面,；打開超凈工作臺(tái)和細(xì)胞房的紫外燈,，照射至少15 min。

       須注意的事項(xiàng)有：紫外燈開啟后,，人不能進(jìn)入,，紫外線對(duì)眼睛和裸露的皮膚均有危害,，若要進(jìn)入，一定要先關(guān)閉紫外燈,，待人離開后打開,。

       二、環(huán)境

       如果操作者技術(shù)規(guī)范且操作嚴(yán)謹(jǐn),，那么當(dāng)環(huán)境惡化時(shí),，也會(huì)導(dǎo)致污染風(fēng)險(xiǎn)的增加。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),，環(huán)境必須潔凈,。

       細(xì)胞污染一個(gè)主要的途徑就是二氧化碳培養(yǎng)箱,。二氧化碳培養(yǎng)箱在培養(yǎng)細(xì)胞取出和放入的過(guò)程中,，直接與空氣接觸，微生物會(huì)被夾帶進(jìn)入,；加之其內(nèi)部濕度高,、溫度適宜,，特別有利于真菌繁殖,。細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿，如果接觸了操作臺(tái)以外的地方,，在放入培養(yǎng)箱前須經(jīng)消毒酒精擦拭,。 但須注意的是,，消毒酒精要經(jīng)操作臺(tái)吹干，否則會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)箱內(nèi)乙醇濃度升高,，酒精會(huì)影響細(xì)胞的正常功能,。

       在很多情況下,， 細(xì)胞培養(yǎng)必須使用二氧化碳培養(yǎng)箱。為了有效的控制該污染途徑,，可采取的措施有：

       ①在加濕托盤內(nèi)添加真菌抑制劑，如硫酸銅,、十二烷基磺酸鈉,，可抑制托盤內(nèi)真菌的生長(zhǎng)；亦或盛裝無(wú)菌的去離子水,，并每周進(jìn)行更換,，托盤用消毒酒精或高溫滅菌的方法進(jìn)行嚴(yán)格的清潔,；

       ②使用無(wú)毒抗真菌清潔劑對(duì)培養(yǎng)箱內(nèi)外進(jìn)行定期清潔，先用清潔劑,、再用消毒酒精進(jìn)行擦拭,；為不留死角，清潔前應(yīng)將培養(yǎng)箱內(nèi)部能拆卸的部件都拆卸下來(lái),，清潔時(shí)也特別要注意不能拆卸的犄角旮旯處；

       ③不正確的使用空氣過(guò)濾器,，那將變?yōu)榕囵B(yǎng)箱一個(gè)可怕的污染途徑,，故須按使用說(shuō)明定期更換空氣過(guò)濾器；

       ④在使用過(guò)程中,，任何溢出液必須立刻用消毒酒精清除干凈,；

       ⑤一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物被污染，立馬清走,。