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細胞培養(yǎng)的注意事項

閱讀:1716        發(fā)布時間:2021/8/13
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        培養(yǎng)前的工作準(zhǔn)備充分

        包括耗材的處理,、試劑的配置,,無菌檢驗等等。

        玻璃器皿的清洗,。對于玻璃器皿(細胞瓶,、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角),,然后沖干凈,。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水沖洗 10 遍,除去殘留酸液,。瓶子之類,,沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h,。晾干后包扎,,160℃ 干烤 2 h 待用。

        試劑配置,。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可,。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

        無菌檢驗,。主要采用過濾除菌:如胰酶,、抗生素、G-418 溶液,、各類培養(yǎng)基,、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等,。有些可以采用高壓滅菌:如 PBS,、D-Hank's等。


        試劑分裝保存

        包括營養(yǎng)液,、胰酶,、血清等。

        血清特別重要,。血清必須貯存于 –20℃,,如果一次無法用完一瓶,可將 40~50ml 分裝于無菌酸處理瓶中,,甚至置青霉素瓶保存,。一般廠商提供的血清為無菌,不需再無菌過濾,。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清,。(一般情況下不影響細胞培養(yǎng))


       瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,,減少沉淀的發(fā)生,。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,因溫度改變太大,,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。


        熱滅活是指 56℃,,30 分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后,,將血清放入,,待溫度升高到 56℃ 后計時,一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次,。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化,。除非必須,一般不要作此熱處理,,因為會造成沉淀物之顯著增多,,且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響,。


        無菌意識要強

        實驗進行前,,超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌,以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,,并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,,才開始實驗操作。


        每次操作只處理一株細胞株,,以避免失誤混淆或細胞間污染,。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,,以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。


        無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,,必要物品,,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,,其它個人實驗用品用完應(yīng)立即拿出,。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域,,一般勿在邊緣區(qū)域操作,。


        小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,,傾斜約 45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。


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